清熱養(yǎng)陰方抑制胃癌細胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的實驗研究.pdf

1、　　目的：通過清熱養(yǎng)陰方穩(wěn)定劑型作用于胃癌細胞,進行對胃癌細胞抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的實驗研究,探尋該方藥的作用機制,以期初步為清熱滋陰法在胃癌治療中的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)。
　　方法：將基于清熱滋陰理論組方的中藥進行水提醇沉法工藝制備,制成穩(wěn)定劑型；體外培養(yǎng)人胃癌細胞株 SGC-7901、MGC-803,通過 MTT比色法應(yīng)用清熱養(yǎng)陰方對胃癌細胞株進行藥物敏感性檢測,根據(jù) 24h 預(yù)實驗得出半數(shù)抑制濃度IC50確定中藥高、中

2、、低劑量,將實驗隨機分為六組,即中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組、順鉑組、對照組與空白組,在倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)與細胞活性,應(yīng)用酶聯(lián)免疫檢測儀測定細胞吸光度 OD 值,得出細胞抑制率。采用免疫組化之鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶法檢測 nm23 和 bcl-2 在胃癌細胞各組的表達情況,計算細胞陽性表達例數(shù)。
　　結(jié)果：⑴MTT 實驗中,實驗組與對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P<0.05；中藥對胃癌細胞株 SGC-79

3、01、MGC-803 均有細胞毒作用；中藥劑量高低與胃癌細胞細胞凋亡正相關(guān),與時間長短正相關(guān),即中藥高劑量組對胃癌細胞抑制增殖作用最強,中藥作用時間越長其抑制作用越強；中藥中劑量組與順鉑組差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P<0.05；中藥高劑量組與順鉑組無顯著差異, P>0.05。⑵免疫組化實驗中, Nm23 對胃癌細胞 SGC-7901、MGC-803 在清熱養(yǎng)陰方高、中劑量組和順鉑 10ug/mL 組的表達與空白組差異顯著,P<0.05；在對照組

4、的表達與空白組無顯著差異,P>0.05。Bcl-2對胃癌細胞 SGC-7901、MGC-803 在對照組的表達與空白組有差異, P<0.05。其中 nm23 在清熱養(yǎng)陰方的藥物影響下陽性表達率較高,均高于對照組；而 bcl-2 在清熱養(yǎng)陰方藥物干預(yù)作用下陽性表達率較低,且均低于對照組。
　　結(jié)論：水提醇沉法工藝制備中藥穩(wěn)定劑型,清熱養(yǎng)陰方中藥與胃癌細胞凋亡密切相關(guān),中藥對胃癌細胞生長增殖具有抑制作用,抑制作用與給藥濃度成正比。中