肺癌分子細(xì)胞病理學(xué)的應(yīng)用研究.pdf

1、研究目的：
　　 1．探討與形態(tài)結(jié)合的M-FISH技術(shù)在輔助纖維支氣管鏡(fiberoptic bronchoscopy，F(xiàn)OB)細(xì)胞學(xué)診斷肺癌的價(jià)值。
　　 2．采用肺癌相關(guān)細(xì)胞學(xué)標(biāo)本檢測(cè)EGFR和k-ras基因突變的可行性。
　　 材料與方法：
　　 1．選取7、8及17號(hào)染色體特異性著絲粒探針(CEP7、CEP8和CEP17)，對(duì)69例中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院病理細(xì)胞室FOB細(xì)胞學(xué)標(biāo)本進(jìn)行與細(xì)胞學(xué)形態(tài)

2、學(xué)相結(jié)合的M-FISH檢測(cè)。
　　 2．收集50例中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院病理細(xì)胞室FOB細(xì)胞學(xué)標(biāo)本、細(xì)針穿刺（fine-needle aspiration，F(xiàn)NA）標(biāo)本和胸水(pleural effusion，PLE)標(biāo)本，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增EGFR基因18-21外顯子和k-ras基因12、13號(hào)密碼子，然后對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行測(cè)序和分析。
　　 結(jié)果：
　　 1．與細(xì)胞學(xué)形態(tài)學(xué)相結(jié)合的M-FISH檢測(cè)
　　

3、(1)在癌病例中，CEP7、CEP8和CEP17的FISH檢測(cè)陽(yáng)性率分別為50.0％(16/32)、80.8.%(21/26)和65.4%(17/26)，CEP8與CEP7的陽(yáng)性率有明顯差異(P=0.015)，而CEP8與CEP17，CEP7與CEP17的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在可疑癌病例中，CEP7、CEP8和CEP17的FISH檢測(cè)陽(yáng)性率分別為46.6%(7/15)66.7%(10/15)和58.8%(7/12)。

4、在非典型病例中，CEP7、CEP8和CEP17的FISH檢測(cè)陽(yáng)性率分別為20.0%(1/5)、33.3(2/6)和25.0%(1/4)。三種探針在可疑癌和非典型兩組病例間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；三種探針在癌與可疑癌兩組病例間的陽(yáng)性率差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；所有正常細(xì)胞均未見(jiàn)染色體改變。
　　 (2)CEP7、CEP8和CEP17三種探針在腺癌中的陽(yáng)性率均高于在鱗癌和小細(xì)胞癌的陽(yáng)性率，但僅CEP8探針在腺癌

5、中陽(yáng)性率與其在小細(xì)胞癌的陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.044)。
　　 (3)FOB細(xì)胞學(xué)診斷肺癌的敏感性為54.1%(33/61)，若以CEP7、CEP8、CEP17任意一個(gè)探針陽(yáng)性為M-FISH陽(yáng)性，細(xì)胞學(xué)結(jié)合M-FISH可使診斷敏感性提高至80.3%(49/61)，且不降低細(xì)胞學(xué)診斷的特異性(100.O%)。
　　 2．EGFR和k-ras基因突變檢測(cè)
　　 (1)50例細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中，DNA提取的滿意率為

6、86.0%(43/50)，其中42例有特異性PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可以進(jìn)行測(cè)序。
　　 (2)EGFR基因總突變率為33.3%(14/42)。其中第19外顯子突變率為16.7%(7/42)，第20外顯子突變率為4.8%(2/42)，第21外顯子突變率為11.9%(5/42)，未檢出第18外顯子突變。EGFR19和21外顯子突變占EGFR突變總數(shù)的85.7%(12/14)，顯著高于EGFR20外顯子突變(P=0.03)。
　　 (

7、3)EGFR女性突變率47.8%(11/23)顯著高于男性(15.8%,3/19)(P=0.028)；非吸煙患者突變率為53.3%(8/15)顯著高于吸煙患者(22.2%，6/27)(P=0.040)；腺癌患者突變率為38.7%(12/31),3例非肺癌患者未見(jiàn)EGFR基因突變。
　　 (4)k-ras基因突變率為4.8%(2/42)，均為第12號(hào)密碼子替代突變。
　　 (5)未發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變與k-ras基因突變共