基于無外源激素的肉蓯蓉細(xì)胞培養(yǎng)工藝研究及其速溶茶開發(fā).pdf

1、針對(duì)肉蓯蓉細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的特點(diǎn)以及食品添加劑安全性的要求,設(shè)計(jì)了無外源激素懸浮培養(yǎng)肉蓯蓉細(xì)胞培養(yǎng)模式,研究了其對(duì)肉蓯蓉懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)和次生代謝產(chǎn)物積累的影響,同時(shí)考察了糖代謝和內(nèi)源激素代謝相關(guān)酶的變化。通過前體飼喂和誘導(dǎo)子添加,有效地促進(jìn)了無外源激素懸浮培養(yǎng)肉蓯蓉細(xì)胞合成苯乙醇苷(PeGs)的能力。采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化PeGs超聲波提取工藝,并與性溫、具有抗氧化活性的紅茶復(fù)配,開發(fā)具有特殊藥理活性的蓯蓉速溶茶。研究結(jié)果如下： 設(shè)計(jì)的

2、無外源激素懸浮培養(yǎng)模式,既不影響肉蓯蓉細(xì)胞的生長(zhǎng),也不影響主要次生代謝產(chǎn)物的合成。在第21d收獲時(shí),細(xì)胞干重、苯乙醇苷、總黃酮和多糖的產(chǎn)量分別達(dá)18.5g/L、3.64、0.75和4.2g/LDW,均比添加外源激素懸浮培養(yǎng)的肉蓯蓉細(xì)胞(HC)合成產(chǎn)量高。無外源激素懸浮培養(yǎng)肉蓯蓉細(xì)胞(HFC)過程中,消耗蔗糖速率較慢,內(nèi)源激素代謝相關(guān)酶IAA氧化酶和細(xì)胞分裂素氧化酶活性變化趨勢(shì)相似。然而肉蓯蓉細(xì)胞合成PeGs的能力不穩(wěn)定,代與代之間變化相

3、對(duì)較大。 苯丙氨酸、酪氨酸和膨潤(rùn)土在無外源激素懸浮培養(yǎng)過程中均能增強(qiáng)PeGs含量的積累。在第12d分別添加時(shí),其最適濃度分別為0.3mmol/L、0.03mmol/L,和1.5g/L,細(xì)胞中PeGs的產(chǎn)量分別是對(duì)照HC的2.02、2.02和2.5倍。在上述濃度基礎(chǔ)上,確定了它們的最佳添加時(shí)間分別為第8d,12d和16d,PeGs的產(chǎn)量分別是對(duì)照HC的1.49、1.41和1.25倍。通過在第16d協(xié)同添加苯丙氨酸、酪氨酸和膨潤(rùn)土誘

4、導(dǎo),PeGs產(chǎn)量達(dá)到最高8.21g/LDW,比對(duì)照HC提高了24％。 利用響應(yīng)面法對(duì)超聲提取無外源激素懸浮培養(yǎng)肉蓯蓉細(xì)胞中PeGs的工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,得到了最佳工藝條件：乙醇濃度50％,超聲功率200W,超聲時(shí)間14min,液料比90:1,PeGs的一次提取得率達(dá)27.63％。采用正交實(shí)驗(yàn)獲得最優(yōu)紅茶提取工藝為：浸提溫度90℃,浸提時(shí)間1.5min,料液比1:20,浸出率達(dá)到23.33％。以肉蓯蓉懸浮細(xì)胞和紅茶浸提液為原料,研制