堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）siRNA表達(dá)質(zhì)粒治療膠質(zhì)瘤的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)小分子干擾RNA(siRNA)表達(dá)質(zhì)粒對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251的抑制作用。 方法：用優(yōu)選靶序列siRNA 850構(gòu)建siRNA表達(dá)質(zhì)粒pGPU6/GFP/Neo-shFGF2，然后采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)染入高表達(dá)bFGF的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251細(xì)胞內(nèi)。根據(jù)綠色熒光蛋白表達(dá)情況檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果，同時(shí)應(yīng)用MTT法觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖活性的變化，以尋找最佳轉(zhuǎn)染條件。應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞mRN

2、A表達(dá)的變化。用Annexin V-FITC/PI雙色標(biāo)記的流式細(xì)胞儀法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的凋亡狀態(tài)。 結(jié)果：綠色熒光蛋白表達(dá)情況表明：siRNA表達(dá)質(zhì)?？赏ㄟ^(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)作用成功轉(zhuǎn)染入膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251細(xì)胞內(nèi)。MTT結(jié)果顯示：MTT吸收值在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)和72小時(shí)下降，與正常對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RT-PCR結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染了不同濃度siRNA表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞mRNA表達(dá)均受抑制。流式細(xì)胞分析結(jié)果表明：實(shí)驗(yàn)組在轉(zhuǎn)染后4