AVBD6對細菌感染和應激的響應及對CLEAP-2表達的影響.pdf

1、β防御素是一類具有廣譜抗菌活性的內源性小分子陽離子抗菌肽。禽類吞噬細胞缺乏氧依賴性殺菌機制，其對細菌的清除更依賴于陽離子抗菌肽。AvBD6是β防御素家族成員之一，是有前景的新型抗生素替代品。
　　目前，關于禽β防御素的定量研究報道較少，而定量研究是深入理解禽β防御素病理生理學意義及臨床應用的基礎。因此，本研究擬通過建立檢測 AvBD6的夾心ELISA法，檢測不同病理生理狀態(tài)下血清或組織中AvBD6的濃度；同時，還探討外源性AvBD

2、6對雞肝臟分泌抗菌肽（LEAP-2）表達量的影響。主要研究結果如下：
　　1、建立檢測AvBD6的夾心ELISA法
　　鼠源包被抗體的免疫原是KLH偶聯(lián)的AvBD6的B細胞線性表位（PGPCRW-KLH）。兔源檢測抗體的免疫原是KLH偶聯(lián)的AvBD6的N端（SPIHACRYQRGV-KLH）。包被抗體、檢測抗體和辣根過氧化酶標記的羊抗兔IgG的最佳工作稀釋倍數(shù)，分別為2500、2000和10000。在20~320 ng/mL

3、的線性范圍內，標準曲線的回歸方程為：y=12024x-2583，（其中y為AvBD6合成肽濃度，x為OD450，R2=0.9842）。
　　2、不同病理生理條件下AvBD6濃度測定
　　隨沙門氏菌感染時間推移，雞十二指腸中 AvBD6的濃度（由34.88 ng/mL至122.64 ng/mL）、空腸中AvBD6的濃度（由45.015 ng/mL至183.39 ng/mL）和血清中AvBD6的濃度（由7320.38 ng/mL

4、至7855.56 ng/mL）均呈現(xiàn)上升趨勢，且與同時間點的對照組差異顯著（P<0.05）。大腸桿菌感染組血清中的AvBD6濃度（7641.49 ng/mL）比同時間點對照組高，且差異顯著（P<0.05）。隨著冷應激時間延長，血清中AvBD6的濃度（由502.095 ng/mL至1525.75 ng/mL）呈上升趨勢，且在刺激12h之后其濃度（3666.12 ng/mL）顯著上調。在注射ACTH（25 IU/kgBW）1d后，AvBD6

5、濃度（1245.60 ng/mL）比同時間點的對照組略低，而連續(xù)注射5d后，AvBD6濃度（4429.96 ng/mL）升高，但是均與同時間點的對照組差異不顯著（P>0.05）。
　　3、外源AvBD6對雞肝臟表達抗菌肽的影響
　　當外源性AvBD6的濃度由20μg/kgBW增高至40μg/kgBW時，應用SABC法檢測組織中cLEAP-2表達變化，發(fā)現(xiàn)肝臟和小腸中cLEAP-2的表達明顯增加，而在脾臟、胸腺、法氏囊僅有少量