小型豬供胰缺血損傷及其相關(guān)機(jī)理的研究.pdf

1、目的： 1、建立穩(wěn)定的小型豬同種異體胰腺移植模型； 2、觀察低溫保存對(duì)供胰功能的影響； 3、探討冷缺血損傷與供胰細(xì)胞凋亡的關(guān)系及其相關(guān)機(jī)制。 方法： 1、30只健康小型豬隨機(jī)配對(duì)，施行豬同種異體胰腺移植15次。將供胰的動(dòng)、靜脈與受體腹主動(dòng)脈、下腔靜脈吻合，靜脈轉(zhuǎn)流入體循環(huán)，十二指腸節(jié)段與受體空腸吻合，胰液空腸內(nèi)引流。術(shù)中監(jiān)測(cè)受體平均動(dòng)脈壓、中心靜脈壓。術(shù)后給予常規(guī)補(bǔ)液及抗凝、抗感染，觀察記錄受體一

2、般情況，計(jì)算其存活率。 2、將40只健康小型豬隨機(jī)配對(duì)，施行豬同種異體胰腺移植20次。受體平均分為四組：1、冷缺血時(shí)間(CIT)0h組；2、冷缺血時(shí)間(CIT)3h組； 3、冷缺血時(shí)間(CIT)6h組； 4、冷缺血時(shí)間(CIT)9h組。切除受體豬胰腺制成糖尿病模型，胰腺移植完成30min后獲取供胰組織標(biāo)本，標(biāo)本分三套，分別用作電鏡觀察、細(xì)胞凋亡原位末端標(biāo)記檢測(cè)及測(cè)定組織中HSP-70、TNF-α表達(dá)。此外，連續(xù)抽

3、取靜脈血，分別測(cè)定血糖、血淀粉酶及血清胰島素濃度。 結(jié)果： 1、共完成全胰十二指腸移植15例，存活1d以上者14例，手術(shù)成功率為93％。供體平均手術(shù)時(shí)間(69.3±7.2)min，受體平均手術(shù)時(shí)間(75.5±13.1)min。15例受體中，1例因術(shù)中失血過(guò)多，于術(shù)后2h死于循環(huán)衰竭；另l例因感染引起腸-腸吻合口瘺于術(shù)后3d死亡；其余13例于手術(shù)后第2d獲取外周血檢測(cè)血糖均正常。 2、四組供胰血流再通2h后受體豬血

4、糖開(kāi)始下降，24h后趨于穩(wěn)定。于供胰移植成功后2h、8h，CIT 9h組血糖、血清淀粉酶均顯著高于其余三組(P<0.05)，且CIT 3h組和CIT 6h組顯著高于CIT 0h組 (P<0.05)，而CIT 3h組和CIT 6h組之間則無(wú)顯著差異(P>0.05)。 3、供胰血流再通后0.5h時(shí)，TUNEL(TDT介導(dǎo)dUTP 末端標(biāo)記法)染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各組供胰組織內(nèi)均可見(jiàn)散在分布的胞核染色陽(yáng)性的胰腺腺泡細(xì)胞，電鏡觀察也進(jìn)一步證實(shí)

5、了供胰再灌注期間組織內(nèi)存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、線粒體輕度腫脹、胞核濃縮、異染色質(zhì)增多的凋亡腺泡細(xì)胞，且低溫保存時(shí)間越長(zhǎng)的供胰，單位面積內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量越多。 定量分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，四組供胰的凋亡指數(shù)(Apoptosis index，AI)間均具有顯著差異(P<0.01)。此外，供胰血流再通后0.5h，四組供胰組織內(nèi)均可見(jiàn)程度不等的TNF-α表達(dá)，陽(yáng)性物質(zhì)分布于細(xì)胞質(zhì)。定量分析發(fā)現(xiàn)各組間TNF-α表達(dá)均具有顯著差異(P<0.05或P<0.01)

6、，其表達(dá)程度依次為：CIT 0h組CIT 3h組>CIT 6h組>CIT 9h組，各組間HSP-70表達(dá)也具有顯著差異(P<0.05或P<0.01)。 結(jié)論： 1、采用供胰的動(dòng)、靜脈與受體腹主動(dòng)脈、下腔靜脈吻合，十二指腸節(jié)段與受體空腸吻合，建立豬的胰腺移植模型，該模型簡(jiǎn)

7、單、穩(wěn)定、可靠，克服了傳統(tǒng)模型并發(fā)癥多、死亡率高等缺點(diǎn)，因而不失為研究胰腺移植的較理想模型。 2、胰腺移植過(guò)程中供胰的冷缺血損傷是移植后胰腺功能不全的重要原因之。因此，若能減輕供胰的冷缺血損傷程度，對(duì)提高胰腺移植成功率可能具有至關(guān)重要的作用。 3、作為細(xì)胞死亡的另一種形式一凋亡參與了供胰低溫保存損傷過(guò)程，且隨著冷缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，胰腺細(xì)胞凋亡程度加重。故此，臨床上若能采取有效的抑制細(xì)胞凋亡措施，可能對(duì)減輕供胰的低溫保存損傷