雌激素受體基因多態(tài)性與發(fā)育性髖關節(jié)脫位關系的研究.pdf

1、目的： 發(fā)育性髖脫位(developmentaldislocationofthehip，DDH)是小兒骨科最常見的四肢畸形之一，地區(qū)與種族不同其發(fā)病率有很大差異，一般白種人發(fā)病率高，黑種人低，而黃種人介于兩者之間。高發(fā)區(qū)如美國、意大利其發(fā)病率為9～12‰，我國報道為1.10～3.80‰不等，女性多于男性，男女之比約為1∶4.75，單側多見，且左側多于右側。 彭明惺等通過家系調查和雙生子研究發(fā)現，發(fā)育性髖脫位一級親屬患病率

2、明顯高于一般人群，表明本病為多基因遺傳病，與遺傳和環(huán)境因素密切相關。早在80年代，國內外都曾有組織相容性抗原HLA與先天性懿脫位相關的報道，為發(fā)育性髖脫位的遺傳背景提供了有力的佐證，目前，多數資料支持遺傳決定韌帶松弛是造成DDH的重要因素。已有許多學者[2-4]的動物實驗表明大量雌激素可誘發(fā)產生韌帶松弛、髖關節(jié)不穩(wěn)定、股骨頭變小從而導致DDH。雌激素受體作為一種調節(jié)蛋白，通過調控與代謝有關的細胞因子的表達，對組織細胞生長增殖起重要作用。

3、近幾年來，在骨關節(jié)的研究中有不少ER方面的報道，特別是雌激素受體基因多態(tài)性的研究甚多，證明雌激素受體在骨關節(jié)疾患發(fā)病機制中起重要作用，Liu[5]的動物實驗研究證實雌激素水平能影響膠原的合成和纖維細胞的增生。國內外尚無有關發(fā)育性髖脫位與雌激素受體(estrogenreceptor，ER)基因的相關報道，為了探討DDH和ER之間的關系，我們通過對DDH患兒血中ER多態(tài)性分析以及正常兒童血中ER多態(tài)性分析對比，進行相關研究。進一步探討DDH

4、的病因和和發(fā)病機理，為預防和臨床提供新的依據。 方法： 1.標本收集：DDH組，共收集2003年2月～2004年2月于山東大學齊魯醫(yī)院住院治療的發(fā)育性髖關節(jié)脫位患者48例，經X片、臨床及手術確診，年齡在2月～14歲之間，其中男性10例，平均年齡2.9歲，女性38例，平均年齡5.2歲，其中包括左側患兒22例、右側患兒12例及雙側患兒14例；對照組48例，取源于齊魯醫(yī)院門診查體患兒(其中不包含先天性骨骼肌肉及泌尿生殖器畸形)

5、，年齡在2月～13歲之間，其中男性10例，平均年齡3.2歲，女性38例，平均年齡4.2歲。所有患者、對照者均未服用激素類藥物。 2.基因組DNA提?。喝⊥庵莒o脈血2ml，EDTA抗凝，提取白細胞。用柱式基因組DNA抽提盒(EZ-10SpinColumnBloodGenomicDNAMiniprepsKit)按說明提取DNA。提取的DNA-20℃保存。 3.引物的設計與合成：引物設計參照文獻。由上海生物工程技術服務有限公司

6、合成。 引物序列：上游：5'-CTGCCACCCTATCTGTATCTTTTCCTATTCTCC-3'；下游：5'-TCTTTCTCTGCCACCCTGGCGTCGATTATCTGA-3'。 4.PCR擴增：反應總體積為50ul，預變性條件94℃5min；循環(huán)條件為94℃變性30s，61℃退火40s，72℃延伸90s，共循環(huán)30次；最后72℃延伸10min。擴增片段長度為13000bp，包括1個內含子和2個外顯子。

7、 5.擴增產物的限制性酶切：應用限制性內切酶XbaⅠ和PvuⅡ分別對PCR產物進行酶切。酶切產物經1％瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙啶(EB)染色，紫外線下觀察結果，一次性成像。 6.數據處理：用基因計數法計算檢驗人群的基因型和等位基因頻率，應用統(tǒng)計軟件進行x2檢驗，研究ER基因的多態(tài)性分布與發(fā)育性髖關節(jié)脫位的關系。 結果： 1.雌激素受體PvuⅡ限制性內切酶酶切多態(tài)性分布與DDH的發(fā)病相關性：DDH組和對照組雌激素受

8、體PvuⅡ內切酶酶切多態(tài)性分布存在差異，說明雌激素受體PvuⅡ內切酶酶切多態(tài)性與DDH的發(fā)生之間存在相關性(p＜0.05)。PvuⅡ酶切后等位基因頻率：DDH組P基因的頻率85.4％，對照組為62.5％，卡方檢驗p=0.011＜0.05，有統(tǒng)計學意義，即P基因型與DDH發(fā)病有相關性。 2.雌激素受體XbaⅠ限制性內切酶酶切多態(tài)性分布與DDH的發(fā)病相關性：DDH組和對照組雌激組雌激素受體XbaⅠ內切酶酶切多態(tài)性分布無顯著性差異，說

9、明雌激素受體XbaⅠ內切酶酶切多態(tài)性與DDH的發(fā)生之間無顯著相關性(p＞0.05)。XbaⅠ酶切后等位基因頻率：DDH組X基因的頻率77.1％，對照組為64.5％，卡方檢驗p=0.178＞0.05，無統(tǒng)計學意義，即X基因型與DDH發(fā)病無明顯相關。 結論： 1.雌激素受體PvuⅡ內切酶酶切基因型多態(tài)性與DDH的發(fā)生之間存在相關性，PvuⅡ酶切位點突變產生P基因型與DDH的發(fā)生相關。 2.雌激素受體XbaⅠ內切酶酶切