艾灸調控RA滑膜細胞功能的JAK-STAT信號通路負反饋機制研究.pdf

1、目的：
　　在艾灸抗炎效應明確、明顯抑制滑膜細胞異常分泌功能、良性調控JAK-STAT信號通路的基本事實下，本研究旨在通過針灸理論指導，艾灸"腎俞"、"足三里"穴治療實驗性RA，圍繞滑膜炎癥關鍵病理環(huán)節(jié)和滑膜細胞分泌功能目標效應，以JAK-STAT信號通路為研究主線，選擇對胞內炎癥信號轉導通路中具有決定性作用的負反饋調節(jié)因子SOCS1、PTPN22、PIAS1作為研究切入點，運用RNAi、RT-PCR、Western blot等方

2、法技術，探索艾灸調控RA滑膜細胞分泌功能的JAK-STAT信號通路負反饋機制，以期更全面和深入地揭示艾灸治療RA的作用原理。
　　方法：
　　36只日本大耳白兔，隨機分為空白對照組、RA模型組、艾灸治療組、艾灸＋SOCS1基因干擾組、艾灸＋PTPN22基因干擾組、艾灸＋PIAS1基因干擾組，6只動物/組。按0.5ml/Kg體重劑量，將福氏完全佐劑平均注入模型組、艾灸各組動物的雙后膝關節(jié)腔內（對照組動物同法注入無菌生理鹽水作為

3、對照），運用慢病毒介導的SOCS1、PTPN22、PIAS1 RNAi作為干預手段，麥粒灸"腎俞"、"足三里"穴治療實驗性RA（5壯/穴/天，6天1療程，共治療3個療程，療程之間休息1天）。
　　1.觀察艾灸治療實驗性RA家兔的抗炎治療效應：RA家兔的整體狀況、膝關節(jié)周長、滑膜組織炎癥病理形態(tài)；
　　2.研究艾灸對實驗性RA滑膜細胞分泌功能的影響：Elisa法檢測滑膜液中IL-1β、TNF-α、EGF、FGF含量；
　

4、　3.研究艾灸對實驗性RA模型滑膜細胞JAK-STAT信號通路SOCS1、PTPN22、PIAS1表達的影響：western blot法及RT-PCR法分別檢測滑膜組織SOCS1、PTPN22、PIAS1蛋白及mRNA的表達；
　　4. SOCS1、PTPN22、PIAS1對艾灸調控RA滑膜細胞JAK-STAT通路影響的研究：RT-PCR法檢測JAK-STAT信號通路相關分子JAK1、JAK2，STAT1、STAT3、STAT4、

5、STAT5、STAT6的表達。
　　結果：
　　1.艾灸"腎俞"、"足三里"穴可以明顯改善RA家兔全身狀況、膝關節(jié)腫脹、關節(jié)滑膜炎癥病理變化，而在SOCS1、PTPN22、PIAS1被干擾的情況下其作用顯著降低。
　　2.滑膜液細胞因子含量檢測結果顯示：與對照組比較，模型組IL-1β、TNF-α、EGF、FGF含量顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，艾灸組IL-1β、TNF-α、EGF、FGF含量顯著降低(P<0.

6、01)；SOCS1干擾組、PTPN22干擾組、PIAS1干擾組與艾灸組比較，下調IL-1β、TNF-α、EGF、FGF含量效果不及艾灸組(P<0.05)。
　　3.滑膜組織SOCS1、PTPN22、PIAS1表達檢測結果顯示：與對照組比較，SOCS1、PTPN22、PIAS1干擾組滑膜組織SOCS1、PTPN22、PIAS1基因、蛋白的表達有顯著減?。≒<0.05），表明慢病毒介導的SOCS1、PTPN22、PIAS1 RNAi模

7、型塑造成功；與對照組比較，模型組家兔滑膜組織SOCS1、PTPN22、PIAS1基因及蛋白表達顯著下降（P<0.01）；與模型組比較，艾灸組家兔滑膜組織SOCS1、PTPN22、PIAS1基因及蛋白表達顯著增加（P<0.01）。
　　4.滑膜組織JAK-STAT信號通路相關信號分子表達檢測結果顯示：
　?。?）與對照組比較，模型組家兔滑膜組織JAK1、JAK2、STAT1、STAT4基因的表達有顯著提高（P<0.05），ST

8、AT3、STAT5、STAT6基因的表達有顯著減?。≒<0.05）；
　?。?）與模型組比較，艾灸組家兔滑膜組織JAK1、JAK2、STAT1、STAT4基因的表達有顯著降低（P<0.05），STAT3、STAT5、STAT6基因的表達有顯著增加（P<0.05）；
　?。?）與艾灸組比較，SOCS1干擾組家兔滑膜組織JAK2、STAT1、STAT4基因的表達有顯著升高（P<0.01），STAT3基因的表達有顯著的下降（P<0

9、.05）；PTPN22干擾組家兔滑膜組織JAK1、STAT1、STAT4基因的表達有顯著升高（P<0.05），STAT3基因的表達有顯著的下降（P<0.05）；PIAS1干擾組家兔滑膜組織JAK1、STAT1基因的表達有顯著升高（P<0.05），STAT3、STAT5、STAT6基因的表達有顯著的下降（P<0.05）。
　　結論：
　　1.艾灸"腎俞"、"足三里"穴可以明顯改善實驗性 RA家兔全身狀況、膝關節(jié)腫脹、關節(jié)滑膜炎

10、癥病理變化，說明艾灸抗炎效應明確，能有效控制 RA滑膜炎癥，但在SOCS1、PTPN22、PIAS1被干擾的情況下其抗炎作用顯著降低，提示艾灸治療RA的抗炎效應可能與SOCS1、PTPN22、PIAS1對JAK-STAT信號通路的負反饋調控關系密切。
　　2.艾灸"腎俞"、"足三里"穴可顯著降低實驗性 RA家兔滑膜液炎癥相關細胞因子IL-1β、TNF-α、EGF、FGF的含量，但在SOCS1、PTPN22、PIAS1被干擾的情況下

11、其作用顯著降低，提示SOCS1、PTPN22、PIAS1對JAK-STAT信號通路的負反饋調控可能與艾灸抑制實驗性 RA滑膜細胞的異常分泌功能密切關聯(lián)。
　　3.艾灸"腎俞"、"足三里"穴可提高實驗性 RA家兔滑膜組織 SOCS1、PTPN22、PIAS1蛋白及基因的表達，提示艾灸治療RA的抗炎效應可能與SOCS1、PTPN22、PIAS1對JAK-STAT信號通路的負反饋調控密切相關。
　　4.艾灸"腎俞"、"足三里"穴可