體外誘導獼猴骨髓基質(zhì)干細胞向許旺細胞分化的實驗研究.pdf

1、【目的】周圍神經(jīng)缺損的修復仍是骨、顯微外科臨床難題之一.組織工程化周圍神經(jīng)(Tissue Engineered Peripheral Nerve,TEPN)的研制,為周圍神經(jīng)缺損的修復帶來了希望,但具有既定生物學功能和活性的組織工程化神經(jīng)種子細胞來源缺乏是制約組織工程化神經(jīng)研制的瓶頸問題之一.其中種子細胞如何保持符合臨床修復要求的生命力、規(guī)?；囵B(yǎng)和大量擴增以及干細胞的定向誘導分化都是組織工程化神經(jīng)種子細胞研究的主要領域.目前用于構(gòu)建T

2、EPN的種子細胞多為自體許旺細胞(Schwann cells SCs),其雖在周圍神經(jīng)再生中有重要作用,但其為終末期細胞,存在增殖能力差,體外分離、培養(yǎng)困難和活性隨代數(shù)增加而下降,需二次手術(shù)等缺點,不能完全滿足種子細胞的要求.近年來,由于干細胞技術(shù)的突破,有可能在體外培養(yǎng)某些干細胞,定向誘導分化為我們所需的組織工程化神經(jīng)的種子細胞,因此國內(nèi)、外一些學者在充分研究SC的發(fā)生、發(fā)育過程的基礎上致力于干細胞源性種子細胞的研究.骨髓基質(zhì)干細胞(

3、Bone marrow stromal cells BMSCs)來源豐富并較易獲取,體外培養(yǎng)具有較強自我復制能力和多向分化潛能,自體移植克服了倫理和免疫排斥問題.國內(nèi)外有研究顯示大鼠骨髓基質(zhì)干細胞,可在體外、體內(nèi)誘導分化為SC樣細胞,并具有其一定的功能,揭示BMSCs可能為TEPN種子細胞的新來源.該研究為該研究室組織工程化周圍神經(jīng)研究的一部分,注重于種子細胞的研究.通過對獼猴骨髓基質(zhì)干細胞的體外分離、培養(yǎng)、擴增的方法、生物學特性、表面

4、標志、遺傳學性能,和體外誘導獼猴骨髓基質(zhì)干細胞向許旺細胞分化實驗方法的研究,為骨髓基質(zhì)干細胞用作組織工程化神經(jīng)種子細胞提供研究基礎.【結(jié)論】(1)用該實驗方法能較容易地獲得大量的獼猴BMSCs,具有與人的BMSCs相似的形態(tài)和表面標志,第3~6代的細胞可滿足以獼猴為動物模型的組織工程化神經(jīng)種子細胞的研究要求.(2)獼猴BMSCs體外培養(yǎng)、擴增受多種因素的影響,37℃,5％CO2,5~10%氧濃度,濕度95%,中性的L-DMEM+10%F