洛鉑對SGC-7901細(xì)胞凋亡及Akt,PTEN,ERK mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的:在全球,胃癌是最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率居惡性腫瘤的第四位,死亡率位居惡性腫瘤的第二位,在每年新發(fā)病例中近70％發(fā)生在發(fā)展中國家。胃癌占我國腫瘤死亡因素的首位,我國胃癌平均年死亡率約為25.2/10萬人口。胃癌是一個多因素、多階段交互作用形成的全身性疾病。手術(shù)、化療、放療是胃癌的主要治療手段。由于胃癌的特點(diǎn),發(fā)現(xiàn)時多數(shù)已經(jīng)是進(jìn)展期,手術(shù)效果不佳,必須選擇綜合治療。目前,由于化療藥物易產(chǎn)生耐藥性,其療效有待于進(jìn)一步提高。在

2、分子水平上,研究胃癌的發(fā)病機(jī)制,可以發(fā)現(xiàn)新的治療途徑,改善胃癌的預(yù)后。細(xì)胞生物學(xué)與分子生物學(xué)的研究進(jìn)展,特別是信息通路研究的開展,開始了靶向治療及靶向藥物的新篇章。靶向藥物針對靶點(diǎn)發(fā)揮抗腫瘤作用,可以選擇優(yōu)勢人群,避免陪綁治療,使患者獲益。癌基因與抑癌基因的發(fā)現(xiàn),及PTEN、ERK、AKT在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中作用的研究,為腫瘤的靶向治療提供新的靶點(diǎn),提高了治療效果。本研究在體外觀察洛鉑對SGC-7901細(xì)胞凋亡及Akt、PTEN、ERKm

3、RNA表達(dá)的影響,為洛鉑在胃癌中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ),同時觀測AKT與ERK分別作為P13K/Akt/Mtor信號傳導(dǎo)通路和RAS/RAF/MEK/ERK信號傳導(dǎo)通路的關(guān)鍵點(diǎn),在細(xì)胞信息傳導(dǎo)中發(fā)揮的關(guān)鍵作用。
　　 材料與方法:
　　 1、細(xì)胞株選用人胃癌細(xì)胞株SGC-7901細(xì)胞。
　　 2、化療藥選用洛鉑。
　　 3、MTT法分析測定不同時間、濃度干預(yù)胃癌細(xì)胞的生長抑制率,確定合適的流式檢測濃度。

4、>　　 4、流式細(xì)胞儀檢測不同濃度藥物干預(yù)的胃癌細(xì)胞,測定細(xì)胞的周期時相變化及凋亡情況。
　　 5、RT-PCR法檢測AKT、PTEN、ERKmRNA的表達(dá)情況。
　　 6、實驗數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS13.0統(tǒng)計處理,采用正態(tài)性檢驗,以P＜0.05表示差異顯著,P＜0.01表示差異非常顯著。
　　 結(jié)果:
　　 1、MTT法測定：洛鉑對細(xì)胞生長的抑制情況,經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析,實驗組各組與陰性對照組兩兩比較,OD值的

5、差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,實驗組之間OD值的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,不同濃度的洛鉑對胃癌細(xì)胞在體外生長均有明顯的抑制作用,且隨著洛鉑濃度的增加和時間的延長,細(xì)胞抑制率明顯增高,呈現(xiàn)劑量時間依賴關(guān)系。
　　 2、流式細(xì)胞儀分析：不同濃度組洛鉑干預(yù)SGC-7901細(xì)胞48h后,測定凋亡細(xì)胞率,各處理組凋亡細(xì)胞百分率與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義,表明洛鉑可以將SGC-7901細(xì)胞阻滯在S期,隨著藥物濃度的增高,阻滯率也增高,證明洛鉑可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡

6、率的增高。
　　 3、不同濃度的洛鉑作用于SGC-7901細(xì)胞24h,48h后,PTENmRNA的表達(dá)增高,AKT、ERKmRNA的表達(dá)減少并且呈劑量時間依賴性,與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1、洛鉑能抑制人胃癌SGC-7901細(xì)胞的生長,并且抑制強(qiáng)度呈劑量時間依賴性,隨洛鉑藥物劑量的增大時間的延長,對細(xì)胞生長抑制作用增強(qiáng)。
　　 2、洛鉑的抑癌作用與AKT、ERK、PTENmRNA

7、在胃癌中的表達(dá)有關(guān),實驗顯示洛鉑干預(yù)后PTENmRNA的表達(dá)增加,AKT、ERKmRNA的表達(dá)減少。
　　 3、信息通路在細(xì)胞生長、凋亡過程中起關(guān)鍵作用,AKT是P13K/Akt/Mtor信號傳導(dǎo)通路的關(guān)鍵點(diǎn),ERK是RAS/RAF/MEK/ERK信號傳導(dǎo)通路的關(guān)鍵點(diǎn),在細(xì)胞信息傳導(dǎo)中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。PTEN作為抑癌基因,可能抑制AKT及ERK基因的表達(dá),進(jìn)一步間接作用于這兩條信息通路,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中共同起作用。