蝗綠僵菌MaVeA基因功能研究.pdf

1、昆蟲病原真菌作為重要的殺蟲真菌，近幾十年來，其在基礎和應用研究方面取得了巨大突破，促進了其產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展。迄今，國際上已登記注冊殺蟲真菌農(nóng)藥近200多種，然而生產(chǎn)成本高、防效不穩(wěn)定等因素制約了其廣泛應用?；染G僵菌（Metarhizium acridum）作為一種環(huán)境友好型的殺蟲劑，研究其產(chǎn)孢和致病機制，對促進其廣泛應用具有積極作用。
　　真菌的產(chǎn)孢受到多個基因的調(diào)控，VeA（sexual development activator

2、）是一個在產(chǎn)孢過程中行使反饋功能的重要基因，其在構巢曲霉中調(diào)控無性和有性的轉(zhuǎn)換。在蝗綠僵菌中發(fā)現(xiàn)了一個與該基因高度同源的基因，將其命名為MaVeA，其在昆蟲病原菌中的功能尚不清楚。本研究以東亞飛蝗（Locusta migratoria）和蝗綠僵菌（Metarhizium acridum）為實驗材料，進一步研究MaVeA基因在蝗綠僵菌生長、產(chǎn)孢及致病中的生物學功能；初步探討該基因在產(chǎn)孢調(diào)控和致病侵染中的機制。主要獲得以下實驗結果：

3、　?、費aVeA的敲除和回復
　　利用同源重組的方法構建了敲除載體，PCR篩選和Southern雜交驗證獲得MaVeA敲除菌株和回復菌株。
　?、贛aVeA對蝗綠僵菌生長發(fā)育和抗逆的影響
　　敲除MaVeA后，蝗綠僵菌萌發(fā)速度提前，菌落減小，菌絲減少，產(chǎn)孢量降低；MaVeA缺失后，蝗綠僵菌對濕熱的耐受性沒有顯著性變化，而對紫外的耐受性顯著降低。
　?、跰aVeA與產(chǎn)孢通路基因的關系
　　各產(chǎn)孢基因（Mafl

4、bA、MaflbB、MaflbC、MabrlA、MafadA和MaFluG）在敲除菌株MaVeA中的表達量與野生型WT相比均有顯著性升高，MaVeA負調(diào)控產(chǎn)孢基因的表達。
　?、躆aVeA導致了色素的變化
　　當菌株在1/4SDAY時，ΔMaVeA菌株孢子呈現(xiàn)黃色，而WT和CP呈現(xiàn)綠色，這說明ΔMaVeA可能導致了色素的變化。而在CM培養(yǎng)基上ΔMaVeA與WT、CP呈現(xiàn)一致的顏色，這說明某種或某幾種元素可能和色素的形成有一定

5、關系。
　?、軲aVeA的缺失導致蝗綠僵菌毒力降低
　　體表點滴實驗中敲除菌株與野生型、回復菌株相比毒力下降，并且蝗蟲血液中蟲菌體數(shù)量顯著減少；注射實驗中敲除與野生型菌株、回復相比毒力無顯著差異。因此，推測MaVeA主要通過體壁侵染過程影響蝗綠僵菌毒力的。
　?、藁染G僵菌毒力降低的原因
　　敲除菌株疏水性降低，附著胞形成率下降，膨壓塌陷率增高，導致致病性減弱。
　　由此可見，MaVeA基因在產(chǎn)孢和致病力方面