谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶μ3對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的： 研究谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶μ3（glutathione S-transferase mu3，GSTM3）在乳腺癌中的作用，建立GSTM3穩(wěn)定過(guò)表達(dá)或沉默的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231，初步觀察GSTM3對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231生物學(xué)特性的影響。 方法： 構(gòu)建GSTM3真核表達(dá)重組質(zhì)粒pcDNA3.1/GSTM3，并利用真核表達(dá)載體pSilencer2.1-U6 neo構(gòu)建GSTM3特異性siRN

2、A表達(dá)質(zhì)粒；以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將構(gòu)建好的正確重組質(zhì)粒和對(duì)照載體質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞，RT-PCR和熒光定量PCR法檢測(cè)GSTM3 mRNA水平，western blot篩選GSTM3蛋白表達(dá)改變的穩(wěn)定細(xì)胞株；應(yīng)用MTT法和細(xì)胞劃痕運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)，觀察GSTM3對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞體外增殖能力、遷移運(yùn)動(dòng)及蒽環(huán)類(lèi)抗腫瘤藥物阿霉素敏感性等影響。 結(jié)果： 1.轉(zhuǎn)染GSTM3真核表達(dá)質(zhì)粒，經(jīng)RT-PCR、熒光實(shí)時(shí)定量P

3、CR和western實(shí)驗(yàn)證明，GSTM3過(guò)表達(dá)的穩(wěn)定乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231成功建立。 2.轉(zhuǎn)染GSTM3特異性siRNA表達(dá)質(zhì)粒，并經(jīng)RT-PCR和熒光實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)證明，GSTM3表達(dá)沉默的穩(wěn)定乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231成功建立。 3.GSTM3對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞生物學(xué)特性的影響：①GSTM3過(guò)表達(dá)和沉默后對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞體外增殖能力均無(wú)明顯影響（P>0.05）；②劃痕運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)中，

4、GSTM3表達(dá)沉默的MDA-MB-231細(xì)胞劃痕愈合快（P<0.05），GSTM3過(guò)表達(dá)的MDA-MB-231細(xì)胞則愈合慢（P<0.05）；③GSTM3過(guò)表達(dá)后，MDA-MB-231細(xì)胞對(duì)葸環(huán)類(lèi)抗腫瘤藥物阿霉素的敏感性增加（P<0.05），GSTM3表達(dá)沉默后，MDA-MB-231細(xì)胞對(duì)阿霉素敏感性降低（P<0.05）。 結(jié)論： 1.成功構(gòu)建GSTM3過(guò)表達(dá)和沉默的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231。 2.GSTM