大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞包膜下移植對(duì)梗阻腎病變影響的初步研究.pdf

1、目的：培養(yǎng)高純度骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs)并鑒定，完善包膜下移植技術(shù)內(nèi)容，從炎癥及纖維化水平兩個(gè)角度初探間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)包膜下移植對(duì)梗阻腎的安全性和有效性。
　　 方法：采用改良貼壁法培養(yǎng)BM-MSCs，觀察其貼壁性能，利用流式細(xì)胞儀在P2代時(shí)測(cè)定細(xì)胞表型以鑒定。采用V管卡壓法建立大鼠可復(fù)性單側(cè)輸尿管梗阻(R-UUO)模型，從細(xì)針、微量注射器以及均勻安排注射點(diǎn)三個(gè)方面建立大鼠腎包膜下移植的技術(shù)內(nèi)容。免疫組化檢測(cè)腎

2、臟抗巨噬細(xì)胞單克隆抗體(ED-1)表達(dá)水平及位置，Masson染色檢測(cè)膠原沉積量。使用IPP軟件分析ED-1平均光密度，以及Masson陽(yáng)染區(qū)域占整個(gè)切片的面積比。根據(jù)正態(tài)性檢驗(yàn)結(jié)果，采用單因素方差分析或非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，均以SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　 結(jié)果：1.分離所得細(xì)胞具典型成纖維樣細(xì)胞形態(tài)，貼壁；細(xì)胞表型檢測(cè)結(jié)果為：CD29陽(yáng)性率99.6％，CD34陰性率98.6％，CD44陽(yáng)性率68.1％，CD45陽(yáng)性率9

3、9.9％，CD90陽(yáng)性率94.9％。2.V管卡壓法可順利建立大鼠R-UUO模型，梗阻成功率為98.6％(69/70)，復(fù)通成功率為81.2％(56/69)，總建模成功率為80％(56/70)。3.使用極細(xì)針結(jié)合微量注射器，均勻安排注射點(diǎn)于腎臟冠狀位中切線兩側(cè)，可有效進(jìn)行MSCs的包膜下移植。4.MSCs包膜下移植組和對(duì)照組比較，ED-1表達(dá)水平在14天時(shí)有顯著差異，膠原沉積量面積比在各時(shí)間點(diǎn)均無顯著差異。5.包膜下注射的兩組和損傷對(duì)照組

4、比較，后者ED-1表達(dá)水平低于另外兩組，其中在14天時(shí)和對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在膠原沉積量的比較中無顯著差別(P>0.05)。6.隨病程變化，損傷對(duì)照組內(nèi)ED-1表達(dá)水平一直呈下降趨勢(shì)，14天組和另外兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，穿刺兩組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較無差異。膠原沉積量在各組內(nèi)均有下降，其中對(duì)照組和損傷對(duì)照組差別有顯著性(P<0.05)。
　　 結(jié)論：1.改良貼壁法可分離、培養(yǎng)獲得高純度骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞