骨髓間充質干細胞移植對嘌呤霉素氨核苷腎病大鼠足細胞修復作用的研究.pdf

1、目的:探討骨髓間充質干細胞(bone mescnchymal stem cells,BMSCs)移植對嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)腎病大鼠足細胞足突的修復作用及其對裂孔隔膜分子Nephrin表達的影響,為BMSCs移植治療腎病綜合征(nephrotic syndrome,NS)提供實驗依據(jù)。
　　 方法:全骨髓貼壁篩選法體外分離、培養(yǎng)、擴增大鼠BMSCs,流式細胞儀鑒定BMSCs

2、表面抗原,5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-bromodcoxyuridine,Brdu)對細胞進行標記;6周齡健康雄性SD大鼠45只隨機分為3組,每組15只。模型組:一次性腹腔注射嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)造模,按15mg/100g注射,于造模即日通過腹主動脈近腎動脈處注射1ml生理鹽水治療;BMSCs組:PAN(15mg/100g)造模,于造模即日通過腹主動脈近腎動脈處注射1ml BMSC

3、s治療(細胞移植前經Brdu標記示蹤),劑量為每只大鼠約1×106/ml;對照組:不予以造模。實驗第10d殺鼠,留取24h尿檢測尿蛋白水平;血標本檢測血清白蛋白(Alb)、總膽固醇(TC)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)等生化指標;電鏡下觀察腎組織足細胞足突改變;免疫組化法檢測Brdu標記的細胞在腎組織中的表達;半定量RT-PCR及Western-blot法檢測Nephrin mRNA及蛋白的表達變化。
　　 結果:

4、　　 ①原代分離培養(yǎng)的BMSCs特異性好,流式細胞儀鑒定CD90表達陽性、CD45表達陰性。
　　 ②實驗第10d,模型組大鼠出現(xiàn)大量蛋白尿、血白蛋白降低、膽固醇升高。與模型組比較,BMSCs組尿蛋白、血膽固醇降低,血白蛋白回升,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各組間血尿素氮、肌酐值無明顯變化,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 ③電鏡下,對照組足細胞足突結構清晰、無融合現(xiàn)象,模型組足細胞足突廣泛融合、變平,而

5、BMSCs組足突部分融合。
　　 ④免疫組化結果顯示經Brdu標記的BMSCs在腎小球及腎小管聚集。
　　 ⑤半定量RT-PCR結果表明,模型組Ncphrin mRNA相對表達量較對照組明顯下降,BMSCs組與模型組比較有所增加,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 ⑥Wester-blot結果表明,模型組Nephrin蛋白的相對表達量較對照組明顯下降,BMSCs組與模型組比較有所增加,差異有統(tǒng)計學意義(P＜