回腸間置術后GK大鼠胰島β細胞的增生-再生及其機制的研究.pdf

1、[目的] 觀察和研究GK大鼠回腸間置術后，胰島結構及胰島細胞的組織病理、形態(tài)學變化，胰島素表達情況和Notch1、Ngn3等基因的表達量的變化，初步探討GK大鼠回腸間置術后胰島細胞的增生/再生及其分子生物學機制。
　　 [方法]取12周齡的雄性GK大鼠30只隨機分為3組:手術組(IT);假手術飲食控制組(C);假手術空白對照組(B)。每組各取大鼠10只，IT組行回腸間置術;C組及B組均行假手術。術后IT組及B組大鼠均給予足量飼料

2、，自由進食;C組予以限制飲食，飼料量按IT組前日進食量的均值給予。術后每周測定大鼠空腹血糖及OGTT各時間點血糖。8周后處死，取胰腺用HE染色、Insulin免疫組化染色方法觀察其組織病理學變化，用RT-PCR方法檢測其Notch1及Ngn3基因表達量的變化。采集實驗數(shù)據(jù)，用SPSS17.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，統(tǒng)計結果以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 [結果]
　　 1.各組術后大鼠空腹血糖及糖耐量改變
　　

3、 術前各組間GK大鼠空腹血糖(FPG)及OGTT曲線下面積(AUC)均無顯著差異。術后第1周，各組大鼠空腹血糖均有下降，各組與術前比較均有統(tǒng)計學意義，但IT組FPG為(8.20±2.41)mmol/L，明顯低于C組與B組，差異均具有統(tǒng)計學意義。自術后第2周開始，B組與C組大鼠空腹血糖逐漸回升，并分別于術后第3周、第4周回升至術前水平，而IT組血糖水平僅有輕度的回升，至術后第8周FPG為(10.13±2.17) mmol/L，仍明顯低于

4、術前水平(17.77±2.94)mmol/L，差異有統(tǒng)計學意義。IT組大鼠術后糖耐量明顯改善，OGTT曲線下面積(AUC)術后第4、8周分別為(57.84±3.81)、(55.62±3.35)，較術前(70.66±4.30)明顯下降，差異均具有統(tǒng)計學意義。而C、B組較術前無明顯改變，IT組與C、B組術后各時間點差異均具有統(tǒng)計學意義。
　　 2.胰島結構及胰島細胞組織病理、形態(tài)學變化
　　 C組及B組胰島結構及胰島細胞組織

5、病理學變化相似。均可見胰島數(shù)量減少，大量胰島間質纖維化、結構破壞嚴重;胰島內β細胞聚集成團的形態(tài)被破壞，離散分布;大量胰島β細胞腫脹變形，空泡樣變甚至凋亡。而IT組中大鼠胰島數(shù)量較多，胰島間質纖維化、結構破壞較少見;胰島內細胞排列緊密，以β細胞為核心聚集成團;胰島內β細胞肥大、增厚，數(shù)量增多。另外可發(fā)現(xiàn)少量胰島細胞（2-10個）聚集成團或單獨存在并入或緊貼胰腺導管或腺泡細胞分布。
　　 3.各組術后胰島素表達情況
　　

6、IT組多數(shù)胰島insulin染色呈棕黃色至棕紅色，染色強度均勻一致，胞漿充滿。而C組和B組，胰島內insulin染色著色不均，部分細胞因嚴重空泡樣變、凋亡而不著色。隨機高倍鏡下陽性細胞面積IT組為(12.70±3.59％)，顯著高于C組(4.91±0.91)％、B組(4.43±1.23)％，差異均有統(tǒng)計學意義。IT組OD值為(107.46±22.23)，顯著低于C組(157.31±9.18)、B組(160.38±11.38)，差異均有統(tǒng)

7、計學意義。
　　 4.各組術后Notch1基因的表達情況
　　 相較內參β-actin，IT組大鼠Notch1基因相對表達量為(0.6309±0.0586)，C組及B組大鼠Notch1基因相對表達量分別為(0.8246±0.0353)、(0.8185±0.0269)。IT組較C、B組均明顯下調，差異均有統(tǒng)計學意義。
　　 [結論]
　　 1.回腸間置術后大鼠空腹血糖水平降低并維持在較低水平，同時糖耐量也得

8、到較好的改善，回腸間置術可顯著改善GK大鼠血糖代謝。
　　 2.回腸間置術后可阻止和預防GK大鼠胰島間質纖維化，維持胰島結構完整，及胰島β細胞正常排列關系;明顯促進胰島β細胞的增生/再生，并出現(xiàn)腺泡細胞和導管細胞向胰島β細胞的轉分化的可能，這可能是GK大鼠術后胰島功能改善和血糖代謝改善的機制之一。
　　 3.回腸間置術后明顯下調Notch1基因表達，抑制過度活化的Notch信號通路，促進胰島β細胞的增生/再生，抑制β細胞