胰腺癌細(xì)胞來(lái)源的exosomes的提取、鑒定及體內(nèi)分布的初步研究.pdf

1、目的:證實(shí)體外培養(yǎng)的胰腺癌細(xì)胞可分泌exosomes，初步分析胰腺癌來(lái)源的exosomes在小鼠全身分布情況。
　　方法:1、對(duì)不同轉(zhuǎn)移潛能的胰腺癌細(xì)胞株panc-02，panc-02-H7進(jìn)行體外培養(yǎng)，收集上清液，采用差速離心聯(lián)合蔗糖梯度離心法提取純化exosomes，通過(guò)BCA蛋白質(zhì)定量法對(duì)exosome進(jìn)行間接定量。并在電鏡下使用液相載網(wǎng)法，觀察exosomes的形態(tài)，以及用Western Blot對(duì)其分子標(biāo)志物進(jìn)行鑒定。2

2、、利用共聚焦熒光成像技術(shù)，觀察PKH67綠色熒光標(biāo)記的exosomes在小鼠各個(gè)主要臟器的分布情況。
　　結(jié)果:1、不同肝轉(zhuǎn)移潛能的胰腺癌細(xì)胞株panc-02，panc-02-H7均可以產(chǎn)生exosomes。通過(guò)電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，兩種exosomes在形態(tài)上并沒(méi)有明顯差異，均呈現(xiàn)為圓形或橢圓形的囊泡狀結(jié)構(gòu)，大小較為均一，直徑大多集中在50～150nm之間。Western Blot顯示，兩種exosomes都表達(dá)exosomes特異性分

3、子標(biāo)志蛋白，CD9、MHC-Ⅰ、TSG101，卻不含凋亡小體蛋白Cytochrome C。電鏡形態(tài)學(xué)鑒定和Western Blot分子標(biāo)志物鑒定兩者符合性良好。BCA蛋白質(zhì)定量是較為簡(jiǎn)便的exosomes的定量方法，并且結(jié)果顯示等量細(xì)胞來(lái)源的exosomes的蛋白含量，高肝轉(zhuǎn)移潛能的panc-02-H7高于panc-02(P＜0.05)。2、通過(guò)共聚焦觀察，在小鼠肺、肝、脾、骨髓和腦中能明顯的觀察到有綠色熒光標(biāo)記的exosomes分布，