兩種皮質發(fā)育障礙大鼠模型形態(tài)學研究和相關基因篩選.pdf

1、目的：構建兩種皮質發(fā)育障礙(disordersofcorticaldevelopment，DCDs)動物模型，研究模型的形態(tài)學特征以及共同的差異基因，為進一步研究DCDs的形成機制提供基因水平研究平臺。 方法：用兩種方法制備DCDs模型：①射線損傷模型(射線組)：采用劑量為1．45Gy的Y一射線照射妊娠15天Sprague-Dawley(SD)大鼠制作子代大鼠DCDs模型；②卡莫司汀(carmustine，1-3-bis—chl

2、oroethyl-nitrosourea，BCNU)藥物損傷模型(藥物組)：取妊娠15天的SD大鼠，腹腔注入卡莫司汀，制作子代大鼠DCDs模型。同時設正常對照組。 對兩種DCDs模型的形態(tài)學比較研究包括：①兩個實驗組子代大鼠出生第30天(P30)斷頭處死取腦，常規(guī)病理學檢查，觀察腦皮質和海馬結構，比較兩種模型在病理表現上的異同。②免疫組化方法觀察Cajal-Retzius(CR)細胞在兩個實驗組子代大鼠大腦皮質中的陽性表達。以上

3、兩項均與正常對照組比較。 取兩種DCDs模型的子代新生鼠(P0)全腦做基因芯片掃描，結果與正常對照組比較，獲得兩種模型共有的差異基因。各組子代鼠PO取腦組織，分別提取總RNA，純化合成雙鏈eDNA；采用體外轉錄方法獲得大量cRNA與Affymetrix的大鼠表達譜芯片2302．0進行雜交。Affymetrix掃描儀掃描芯片結果，GCOSl．4軟件讀取、處理數據。差異基因篩選標準為實驗組和對照組信號比值的絕對值≥2，即Signal

4、logratio絕對值≥0．58，正值為上調基因；負值為下調基因。得到兩個模型共有的差異基因，做為DCDs模型相關的候選基因。 結果：①兩個實驗組子代大鼠腦外觀均比對照組偏小；藥物組鼠腦大小與藥物劑量呈反比。常規(guī)病理檢查可見射線組和藥物組較大劑量(16mg／kg給藥)大鼠出現廣泛的皮質發(fā)育不良，大腦皮質變薄，層狀結構紊亂。海馬線型結構中斷，CAl區(qū)見神經元結節(jié)狀聚集。類似人類神經元結節(jié)性移位。藥物組較小劑量時海馬形態(tài)學改變與射線

5、組一致性不夠好。②免疫組化方法研究P30模型鼠大腦皮質內CR細胞大量存在；對照組P30大鼠大腦內未見到CR細胞。③模型鼠與對照組比較，共有54個差異表達基因。其中3個基因達上調，包括MT-protocadherin基因等；51個基因表達下調，包括somatostatinreceptorl(Sstrl)和Transforminggrowthfactor，beta2(TGFβ2)等。這些差異基因功能大多和細胞分裂周期調控、細胞遷移、細胞間的