線粒體膜ATP敏感鉀通道對人哮喘氣道平滑肌細(xì)胞增殖和分泌的影響.pdf

1、目的：支氣管哮喘是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，它的特征是慢性氣道炎癥，氣道重構(gòu)和氣道高反應(yīng)性（AHR），其中氣道慢性炎癥被認(rèn)為是哮喘的本質(zhì)。以往觀點(diǎn)認(rèn)為氣道平滑肌細(xì)胞在這個病理過程中只是作為被動的靶細(xì)胞，在炎癥介質(zhì)的刺激下發(fā)生收縮和痙攣等反應(yīng)。但是近年來的研究表明，氣道平滑肌細(xì)胞不僅具有收縮功能，而且還能發(fā)生表型轉(zhuǎn)化，在外界環(huán)境因素的刺激下從收縮型轉(zhuǎn)化為增殖型的合成表型，合成分泌多種炎癥因子和細(xì)胞因子，其中的具體機(jī)制十分復(fù)雜。在我們以往

2、的研究中發(fā)現(xiàn)哮喘可引起大鼠氣道平滑肌細(xì)胞的線粒體膜ATP敏感鉀通道開放，促進(jìn)氣道平滑肌細(xì)胞增殖和表型轉(zhuǎn)化，參與氣道重構(gòu)。但對于人支氣管氣道平滑肌細(xì)胞（HASMCs）方面的研究尚少見報道。故本實驗擬在我們以往研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討線粒體膜ATP敏感鉀通道對人支氣管氣道平滑肌細(xì)胞增殖和分泌的影響，以期探索線粒體膜ATP敏感鉀通道通道在支氣管哮喘中的作用，為哮喘的防治尋找新的途徑。
　　 方法：采用手術(shù)室肺葉切除患者的肺組織，分離培養(yǎng)

3、正常人氣道平滑肌，用哮喘患者血清體外制成被動致敏的人哮喘氣道平滑肌細(xì)胞模型，取哮喘和正常HASMCs分為6組進(jìn)行干預(yù)：正常對照組；正常+二氮嗪(Diazoxide，DE)（線粒體膜ATP敏感鉀通道的選擇性開放劑）組；正常+5-羥基癸酸鹽(5-hydroxydecanoate，5-HD)（線粒體膜ATP 敏感鉀通道的選擇性阻斷劑）組；哮喘對照組；哮喘+DE組；哮喘+5-HD組。利用羅丹明（R-123）熒光染色，激光共聚焦顯微鏡成像檢測線粒

4、體膜電位（△ψm），二氯熒光素雙醋酸鹽(DCFH-DA)熒光染色法檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）含量，MTT 法檢測細(xì)胞增殖的情況，逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測氣道平滑肌細(xì)胞中轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：①正常+DE組與正常對照組相比，活性氧產(chǎn)生增多，△ψm 去極化，R-123熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，細(xì)胞增殖增多，TGF-β１的表達(dá)增高（P＜0.05），而正常+5-HD組與正常對照組相比，上述指標(biāo)無顯著差異；②與正常對照

5、組相比，哮喘組活性氧產(chǎn)生增多，△ψm 去極化，R-123 熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，細(xì)胞增殖增多，TGF-β１的表達(dá)增高，哮喘+DE組與哮喘對照組相比，上述指標(biāo)增強(qiáng)，哮喘+5-HD組與哮喘對照組相比，上述指標(biāo)降低（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：哮喘可引起人氣道平滑肌細(xì)胞線粒體膜ATP敏感鉀通道開放，使活性氧的產(chǎn)生增多，引起△ψm 去極化，促進(jìn)人氣道平滑肌細(xì)胞的增殖和向合成表型的轉(zhuǎn)化，同時TGF-β1的表達(dá)也相應(yīng)增加，因而從多個方面參與氣道重