NF-κB對(duì)哮喘氣道重塑平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的作用及PDTC干預(yù)研究.pdf

1、目的：氣道平滑肌表型轉(zhuǎn)換是哮喘氣道重塑的重要特征，而前期體外研究發(fā)現(xiàn)NF-kB信號(hào)通路對(duì)其表型轉(zhuǎn)化起到關(guān)鍵性作用。在此基礎(chǔ)上，本研究通過(guò)在體檢測(cè)哮喘氣道平滑肌細(xì)胞表型標(biāo)志物的改變特征及相關(guān)功能改變，探討NF-kB信號(hào)通路對(duì)其影響，同時(shí)明確干預(yù)NF-kB信號(hào)通路對(duì)哮喘氣道重塑、氣道高反應(yīng)性及慢性炎癥的作用，為尋找新的哮喘治療方法提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:采用腹腔注射和重復(fù)霧化吸入卵清白蛋白的方法建立急性及慢性哮喘小鼠模型，NF

2、-kB特異性抑制劑PDTC腹腔注射對(duì)哮喘小鼠進(jìn)行干預(yù)；采用BUXCO無(wú)創(chuàng)肺功能儀測(cè)定各組小鼠氣道高反應(yīng)性；HE染色觀察組織大體改變及炎癥浸潤(rùn)度；Masson trichrome染色檢測(cè)膠原沉積情況；免疫組織化學(xué)檢測(cè)氣道平滑肌層厚度；通過(guò)形態(tài)學(xué)定量分析對(duì)比各組膠原面積及氣道平滑肌層厚度；α-SMA和 PCNA免疫熒光檢測(cè)增殖細(xì)胞數(shù)量；RT-PCR檢測(cè)肺支氣管表型標(biāo)志物以及COL1A1mRNA表達(dá)量；Western-Blot檢測(cè)磷酸化 P6

3、5和α-SMA蛋白表達(dá)量；RayBiotech蛋白芯片檢測(cè)血清中炎癥因子表達(dá)水平。
　　結(jié)果：（1）急性及慢性哮喘小鼠氣道高反應(yīng)性指標(biāo)Penh值較對(duì)照組均顯著增高，而干預(yù)組較哮喘組顯著降低；（2）慢性哮喘小鼠平滑肌層面積較對(duì)照組顯著增高，干預(yù)組則有顯著緩解；急性哮喘小鼠平滑肌層增厚不顯著；（3）氣道膠原面積定量急性哮喘各組定量比較亦無(wú)顯著差別，慢性哮喘模型中，形態(tài)定量學(xué)分析發(fā)現(xiàn)哮喘組膠原面積顯著高于其對(duì)照組，而 PDTC干預(yù)后較哮

4、喘組膠原面積顯著減少；（4）免疫熒光染色未檢出氣道平滑肌與 PCNA共表達(dá)，可見(jiàn)急性哮喘肺內(nèi)PCNA+的細(xì)胞數(shù)量較正常組明顯增多，主要位于氣道以及血管周?chē)韵∈笪礄z出增殖細(xì)胞；（5）通過(guò) qPCR發(fā)現(xiàn)慢性哮喘模型中，哮喘組α-SMA、calponin和 SM-MHC較對(duì)照組顯著下降。急性哮喘小鼠模型中，只有 calponin在哮喘組中顯著下調(diào)，PDTC干預(yù)組在慢性和急性哮喘模型中均有緩解表型轉(zhuǎn)化的作用，然而calponin在慢性

5、哮喘模型中的下降不能被PDTC干預(yù)逆轉(zhuǎn)。Western blot顯示PDTC干預(yù)后哮喘小鼠phospho-P65表達(dá)量顯著降低，同時(shí)α-SMA蛋白升高。（6）急性哮喘模型中，哮喘組血清G-CSF、IL-6、和IL-17相比正常對(duì)照組顯著增高，PDTC干預(yù)顯著降低了G-CSF和IL-6水平，但不影響IL-17。慢性哮喘模型中，哮喘組中只有IL-17和TNF-α顯著增高，TNF-α在干預(yù)組中顯著降低。
　　結(jié)論：（1）哮喘模型小鼠氣道