姜黃素對血管緊張素Ⅱ誘導的培養(yǎng)心肌細胞血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)mRNA表達的影響.pdf

1、目的:通過體外培養(yǎng)SD大鼠乳鼠心肌細胞,給與藥物(姜黃素)及相應抗體的作用后,加以血管緊張素Ⅱ誘導,觀察藥物組、抗體組及陰性對照組、陽性對照組之間血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)的mRNA表達的差異,從而證明姜黃素對心肌細胞LOX-1表達的影響,并進一步探討這種作用對于某些心血管疾病可能的預防及延緩作用。
　　方法:實驗于2010年3月至2010年9月在安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院動物房手術中心及中心實驗室完成。①取6-

2、10只SPF級SD大鼠新生乳鼠(1-2天),取出心臟,采用分次消化方法提取心肌細胞,采用DMEM/F12加10％小牛血清作為培養(yǎng)基,培養(yǎng)原代心肌細胞。②培養(yǎng)48小時后更換為不含血清的DMEM/F12培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24小時。③將培養(yǎng)細胞分為A、B、C、D4組,分別為A組陰性對照組,B組血管緊張素Ⅱ組,C組血管緊張素Ⅱ+LOX-1抗體組,D組血管緊張素Ⅱ+姜黃素組。④更換無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24小時,將C組的培養(yǎng)液換成含有10μg/mlL

3、OX-1抗體的含藥培養(yǎng)液,將D組細胞的培養(yǎng)液更換成含有5μmol/L姜黃素的含藥培養(yǎng)液,作用3h。3h后更換B、C、D組細胞的培養(yǎng)液,換成含有0.1μmol/L血管緊張素Ⅱ的含藥培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)24h。⑤藥物作用24小時后收集細胞,用Trizol試劑提取細胞總RNA,采用RT-PCR檢測每組細胞LOX-1mRNA的含量。RT-PCR結果通過凝膠成像處理系統(tǒng)做積分吸光度測定和分析,以各組目的基因擴增條帶的吸光度值與內參β-actin條帶的

4、吸光度值之比作為目標mRNA的表達量。
　　結果:①實驗重復三次,體外培養(yǎng)的乳鼠原代心肌細胞存活良好,以0.4%的臺盼蘭染液染色后計數,細胞存活率約為95%-97%。每個高倍鏡視野均可見70%-80%細胞有節(jié)律搏動,單個細胞搏動頻率8-70次/分不等,細胞密度較大部位搏動較為一致,頻率為30-70次/分。②血管緊張素Ⅱ可以明顯上調心肌細胞表面LOX-1的表達,與陰性對照組比較,P<0.05。③一定濃度的姜黃素可以有效阻止血管緊張素