CXCL13與重癥肌無力的相關(guān)性研究及實驗性自身免疫性重癥肌無力小鼠模型的建立.pdf

1、重癥肌無力主要是由乙酰膽堿受體抗體介導(dǎo)的，補體參與，細胞免疫依賴性，針對神經(jīng)肌肉接頭處突觸后膜上乙酰膽堿受體的自身免疫性疾病。目前，重癥肌無力的確切發(fā)病機制尚未完全明確，但普遍認為該病的發(fā)生與乙酰膽堿受體抗體的產(chǎn)生密切相關(guān)。B淋巴細胞是唯一能夠分泌抗體的細胞，在體液免疫中發(fā)揮著重要作用，尤其是在血清抗體陽性的重癥肌無力的發(fā)病過程中扮演了重要角色。趨化因子是能使細胞發(fā)生趨化作用的細胞因子的總稱，為一類結(jié)構(gòu)功能相似，分子量在8～10kD的小

2、分子蛋白質(zhì)，其主要作用是趨化細胞遷移。根據(jù)多肽鏈一級結(jié)構(gòu)的不同將趨化因子分為CXC亞家族和CC亞家族。其中CXC亞家族分子靠近N-端兩個半胱氨酸之間有一個任意氨基酸，主要作用于中性粒細胞，并對淋巴細胞有趨化作用。趨化因子受體是一類介導(dǎo)趨化因子行使功能的GTP蛋白耦聯(lián)的跨膜受體，通常表達于免疫細胞、內(nèi)皮細胞等細胞膜上。趨化因子能與其受體相互作用，通常一種趨化因子受體能與多種趨化因子相結(jié)合，而一個趨化因子可能有多個高親和性受體，他們共同構(gòu)成

3、復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)。CXCL13是CXC趨化因子家族成員之一，已經(jīng)被證實在B淋巴細胞尋靶和淋巴組織中B細胞區(qū)的形成中有著重要作用，但目前尚無明確的關(guān)于CXCL13與重癥肌無力發(fā)病機制相互關(guān)系的報道。 實驗性自身免疫性重癥肌無力動物模型是研究重癥肌無力發(fā)病機制的重要工具之一。目前，建立實驗性自身免疫性重癥肌無力動物模型有主動免疫和被動免疫兩種方法，但是各有優(yōu)缺點。一直以來，人類也在不斷地探索，尋求建立完美的實驗動物模型的方法，但尚未達

4、成這一目標。 目的:通過檢測CXCL13在重癥肌無力患者血清中的水平以及CXCL13 mRNA在胸腺組織表達水平，來探討CXCL13在重癥肌無力的發(fā)病中的地位和作用，并闡述其在治療研究中的價值。本研究擬通過被動移植重癥肌無力患者增生的胸腺的方法建立實驗動物模型，為研究重癥肌無力的發(fā)病機制提供了一種新的實驗工具。 方法:收集湘雅醫(yī)院胸外科、神經(jīng)內(nèi)科重癥肌無力患者治療前及治療后一周、一個月的血液標本各54份及健康體檢者血液標

5、本30份，用ELISA方法檢測CXCL13在血清中的濃度。收集20例胸腺增生合并重癥肌無力住院手術(shù)患者的胸腺標本及10例先天性心臟病手術(shù)患者胸腺組織標本，同時進行胸腺組織培養(yǎng)，用ELISA方法檢測CXCL13在胸腺組織培養(yǎng)液上清中的水平，同時用RT-PCR的方法檢測CXCL13mRNA在胸腺組織的表達水平，分析CXCL13、胸腺與重癥肌無力三者之間的關(guān)系。將重癥肌無力患者增生的胸腺組織被動移植到BALB/c裸小鼠腹腔建立重癥肌無力動物模

6、型，并通過癥狀觀察、電生理檢測、免疫組化、透射電鏡和乙酰膽堿受體計數(shù)的方法來評價該動物模型，分析其用于重癥肌無力發(fā)病機制研究中的意義。 結(jié)果:54份重癥肌無力患者血清中CXCL13的濃度水平明顯高于正常對照組(p<0.05)，在接受了腎上腺皮質(zhì)激素治療或胸腺切除手術(shù)的一個月之后，患者血清中CXCL13濃度水平較治療之前有明顯下降(p<0.01)，而CXCL13在眼肌型重癥肌無力和全身型重癥肌無力患者血清中的濃度水平無明顯差異(p

7、>0.05)；CXCL13在重癥肌無力患者胸腺組織培養(yǎng)上清液中濃度水平顯著高于正常對照組(p<0.01)，而在培養(yǎng)液中加入地塞米松后，其濃度水平會明顯下降，并且與地塞米松的劑量呈負相關(guān)，而且在增生的胸腺組織中，CXCL13 mRNA的表達水平也顯著高于正常胸腺組織(p<0.01)；在建立重癥肌無力實驗動物模型的研究中，25只實驗組小鼠有9只(36％)出現(xiàn)了肌無力的表現(xiàn)，并通過電生理檢測、免疫組化、透射電鏡和乙酰膽堿受體計數(shù)的方法檢測證實

8、其組織改變與人類重癥肌無力組織改變相近。 結(jié)論: CXCL13在重癥肌無力患者血清中的濃度較正常人群明顯增高，但在經(jīng)過激素治療和胸腺切除之后，其在血清中的濃度會緩慢下降，說明其可能可以作為重癥肌無力患者血清指標，動態(tài)監(jiān)測其水平變化可作為患者對治療的反應(yīng)性檢測指標；CXCL13有可能成為評價重癥肌無力患者預(yù)后的指標之一；在重癥肌無力患者的增生胸腺組織中，存在著CXCL13 mRNA的大量表達，從而導(dǎo)致了CXCL13在組織培養(yǎng)上清液

9、中及血清中水平增加，胸腺CXCL13的產(chǎn)生中扮演了重要角色。；地塞米松可直接抑制胸腺產(chǎn)生CXCL13；CXCL13有可能成為重癥肌無力治療研究的新靶點；通過將重癥肌無力患者的胸腺組織被動轉(zhuǎn)移至BALB/c裸小鼠腹腔的方法，可以成功建立實驗性自身免疫性重癥肌無力動物模型，此模型可作為研究胸腺與MG發(fā)病機制關(guān)系的實驗工具。 創(chuàng)新點: 1、首次通過ELISA方法和PT-PCR方法測定血清中CXCL13濃度水平及胸腺組織中CXC

10、L13 mRNA的表達，從而評價了CXCL13、胸腺、重癥肌無力三者之間的關(guān)系。 2、通過胸腺組織塊培養(yǎng)模擬胸腺在體內(nèi)生長的環(huán)境，并加用地塞米松進行干預(yù)，從而證明地塞米松可抑制胸腺產(chǎn)生CXCL13，為將來重癥肌無力治療的研究提供一個新的切入點。 3、首次采用將MG患者增生胸腺組織被動轉(zhuǎn)移到BALB/c裸小鼠腹腔的方法成功建立了重癥肌無力動物模型，該模型可更好地用于胸腺與MG發(fā)病關(guān)系的進一步研究，為MG發(fā)病機制的研究工作提