表達(dá)載體介導(dǎo)的Notch2基因沉默抑制人骨肉瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文表達(dá)載體介導(dǎo)的Notch2基因沉默抑制人骨肉瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究姓名：陳劍鋒申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：骨科指導(dǎo)教師：陳安民201104華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文3一般來說Notch2蛋白的陽性表達(dá)主要體現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜或細(xì)質(zhì)，顏色一般是呈棕黃色，散在性的顆粒分布。82例骨肉瘤中有64例呈陽性表達(dá)，陽性率78.1%(6482)，對照組為17.6%(634)，這兩個組之間的差異還是具有和明顯

2、的(P0.05)。(2)Notch2在MG63中的表達(dá)情況與骨肉瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力是有很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性Notch2mRNA和蛋白在MG63中的表達(dá)結(jié)果顯示:在MG63人骨肉瘤細(xì)胞株細(xì)胞中與對照組比較，Notch2mRNA和蛋白表達(dá)水平分別0.860.09vs0.470.050.760.04vs0.220.08，具有顯著性差異(p0.05)。(3)Notch2在逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的小RNA干擾特異性沉默MG63細(xì)胞系中的表達(dá)情況Notch2在逆轉(zhuǎn)錄

3、病毒介導(dǎo)的小RNA干擾特異性沉默MG63細(xì)胞系中的表達(dá)相對于而言對照組而言是十分明顯的，其抑制效率71%(p0.05)，但是作為對照組的MG63Notch2RNAi的表達(dá)較MG63細(xì)胞系試驗(yàn)中沒有明顯的改變，這個結(jié)果提示本研究中Notch2的表達(dá)是可以通過逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的小RNA干擾來有效沉默MG63其量的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。通過體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)Notch2的表達(dá)可以影響骨肉瘤細(xì)胞的侵襲能力MG63Notch2RNAi細(xì)胞遷移顯下降，24小時劃痕

4、愈合率分別為52%vs75%，差異具有義(P0.05)。我們在實(shí)驗(yàn)中通過Transwell侵襲小室測定法來檢測出MG63Notch2RNAi細(xì)胞在其干預(yù)后運(yùn)動能力，結(jié)果也是顯示MG63Notch2RNAi細(xì)胞運(yùn)動侵襲能力是下降很明顯的，計數(shù)經(jīng)過約24小時細(xì)胞培養(yǎng)后穿過Transwell膜的每低倍視野細(xì)胞數(shù)情況計數(shù)結(jié)果分別為32.675.3，顯示其結(jié)果還是具有較強(qiáng)的差異性(P0.05)。同時用MTT法來測定MG63Notch2RNAi與其