長鏈非編碼RNAH19在胃癌干細胞中的表達及功能研究.pdf

1、[目的]
　　探討長鏈非編碼RNA H19（lncRNA H19）在胃癌細胞系和胃癌干細胞中表達的差異性，及其對腫瘤干細胞特性及生物功能的影響，為研究胃癌的特異性靶向治療奠定基礎(chǔ)。
　　[方法]
　　采用實時熒光定量PCR方法（qRT-PCR）檢測lncRNA H19在胃癌組織中的表達水平，通過無血清懸浮培養(yǎng)法從MGC-803胃癌細胞系中分離干細胞樣亞群，同時檢測lncRNA H19在MGC-803胃癌細胞系和瘤球細胞

2、中的表達水平，從而分析lncRNA H19與腫瘤干細胞的潛在聯(lián)系，在體外利用慢病毒包裝法將lncRNA H19干擾質(zhì)粒(siH19)和對照質(zhì)粒(con-H19)分別轉(zhuǎn)染入胃癌細胞，通過嘌呤霉素篩選穩(wěn)定細胞系，Real-time PCR檢測H19 mRNA的下調(diào)效果，瘤球形成實驗和細胞克隆形成實驗檢測細胞的自我更新與增殖能力的改變，蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)、流式細胞術(shù)（FCM）檢測干細胞相關(guān)因子CD24、CD44的表達變化

3、，以此觀察lncRNA H19對胃癌干細胞生物學特性的影響，從而探討lncRNA H19在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中的生物學作用。
　　[結(jié)果]
　　qRT-PCR結(jié)果顯示 H19在胃癌組織中的表達量較相應的正常胃上皮組織顯著升高（P<0.05）；無血清懸浮培養(yǎng)的MGC-803瘤球細胞較其貼壁細胞顯著高表達H19 mRNA(P<0.01)；通過qRT-PCR驗證了細胞的慢病毒包裝效果，結(jié)果顯示干擾組(siH19)的H19表達量顯著減

4、少（P<0.001）；基因干擾H19的表達后，MGC-803細胞干擾組較對照組在無血清培養(yǎng)基條件下的成瘤率明顯降低（P<0.05），平板克隆形成實驗與瓊脂克隆形成實驗結(jié)果也顯示干擾組的克隆形成能力與增殖能力較對照組下調(diào)(P<0.01)；熒光實時定量PCR檢測干細胞相關(guān)因子CD24、CD44在干擾組中表達下調(diào)（P<0.05）；Western blot結(jié)果顯示：用特異性siRNA干擾H19的表達后，胃癌細胞CD44蛋白表達水平減少；通過流式

5、細胞技術(shù)檢測后發(fā)現(xiàn)，下調(diào) MGC-803胃癌細胞的H19表達水平同時降低了CD24(+)CD44(+)的細胞百分比。
　　[結(jié)論]
　　胃癌組織較相應胃正常上皮組織中存在著H19的高表達,同時干細胞亞群中H19的表達高于胃癌組織。下調(diào)胃癌細胞的H19表達可以降低胃癌細胞的增殖力和克隆能力，同時降低成瘤能力及自我更新的干細胞特性。因此，本實驗認為lncRNA H19在胃癌干細胞特性方面的維持發(fā)揮著一定的作用，可能成為干預胃癌干