養(yǎng)殖池塘中降解氨氮有益微生物的分離與鑒定.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)在6月到10月期間采集日照和東營(yíng)兩個(gè)蝦蟹養(yǎng)殖區(qū)四種不同的養(yǎng)殖模式池塘中的水樣和底泥并分離樣品中的細(xì)菌,篩選降解氨氮效果良好的菌株,對(duì)不同月份分離的菌株進(jìn)行統(tǒng)計(jì);通過(guò)16SrDNA對(duì)所篩選到的菌株進(jìn)行序列分析,確定菌株的種類;結(jié)合菌株對(duì)氨氮和亞硝酸鹽降解率和菌種類型挑選出兩種不同類型的細(xì)菌,并將其分別添加到凡納濱對(duì)蝦的養(yǎng)殖環(huán)境中,驗(yàn)證了兩株細(xì)菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦的安全性。主要研究結(jié)果如下:
　　1.養(yǎng)殖池塘中氨氮降解微生物的分離和篩

2、選
　　采用直接分離和富集培養(yǎng)分離法,從日照和東營(yíng)4種不同蝦蟹養(yǎng)殖模式的池塘中分離多株亞硝化細(xì)菌和硝化細(xì)菌。采用直接分離共從6月日照的樣品中分離純化到66株細(xì)菌,通過(guò)篩選得到20株可高效降解亞硝酸鹽的硝化細(xì)菌,14株高效降解氨氮的亞硝化細(xì)菌;采用富集培養(yǎng)分離法,從所有不同月份的樣品中分離篩選出233株亞硝化細(xì)菌和201株硝化細(xì)菌,經(jīng)過(guò)篩選培養(yǎng)基篩選最終得到66株對(duì)亞硝酸鹽具有較高降解能力而且效果穩(wěn)定的菌株,降解率中最高的可達(dá)到10

3、0％;13株對(duì)氨氮具有較高降解能力而且效果穩(wěn)定的菌株,降解最高的達(dá)到了83.63%。對(duì)分離菌株數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果表明6、7、8三個(gè)月份分離得到的菌株數(shù)量較多。通過(guò)比較兩種不同分離方式分離的菌株,富集培養(yǎng)法較直接分離法具有一定的優(yōu)勢(shì)。
　　2.養(yǎng)殖池塘中氨氮降解微生物的鑒定
　　對(duì)上一章中所篩選到的所有具有高降解能力的菌株進(jìn)行鑒定。16SrDNA序列分析表明,鑒定的菌株中與標(biāo)準(zhǔn)菌株Marinobacter spp.(18株)和

4、Pseudoalteromonas spp.(21株)相似度在97%以上,這兩類細(xì)菌的豐度最高;與Vibrio spp.相似性在99%以上的菌株次之(7株),其次為Halomonas spp.(4株),Marinomonas spp.(3株),Desemzia incerta(1株),Exiguobacterium aurantiacum(1株),Alteromonas spp.(1株),Thalassospira spp.(1株),S

5、phingomonas spp.(1株),菌株的相似性均在99%以上。綜合菌株的類型、降解率和分離源,挑選兩株細(xì)菌(菌株7RO29和菌株8DH26),結(jié)合形態(tài)觀察、生理生化指標(biāo)測(cè)定以及16S rDNA序列分析等方法對(duì)兩株菌進(jìn)行分類學(xué)鑒定,結(jié)果表明該兩株菌分別為鹽單胞菌(Halomonas sp.)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)。
　　3.分離的微生物對(duì)凡納濱對(duì)蝦的安全性檢驗(yàn)
　　為檢驗(yàn)菌株7RO29和