IL-4-STAT6信號轉導通路中Igε基因轉錄抑制分子機制的初探.pdf

1、研究目的： STAT6是STATs家族的一員，可被細胞因子IL-4特異性激活。IL-4與其受體結合后，循JAK/STAT6信號轉導通路，將活化信號通過蛋白質的相互作用逐級傳遞，最終激活特異性轉錄激活因子STAT6并啟動靶基因的轉錄與表達，促進靶蛋白的合成。IL-4/STAT6信號通路的過度活躍參與包括哮喘等變態(tài)反應性疾病、腫瘤等多種疾病的進程。大量研究顯示STAT6-TAD可結合一系列轉錄共激活因子p100、CBP和NCoA-1等來提高

2、STAT6介導的轉錄活性和基因表達水平。但迄今為止，STAT6轉錄調控的機制尚不明確。PSF蛋白是我們前期通過GST融合蛋白釣取結合質譜分析技術發(fā)現(xiàn)的在IL-4刺激后可與STAT6-TAD結合的抑制IL-4/STAT6信號轉導通路靶基因之一-Igε基因轉錄活性的轉錄抑制因子。本課題的研究目的在于初步探討PSF抑制Igε基因轉錄活性的分子機制。
　　 方法：本課題分兩部分進行：第一部分，PSF與STAT6結合的位點研究，利用免疫共

3、沉淀法的方法確定PSF與STAT6結合的STAT6的功能位點。同時構建含有PSF不同功能片段的真核表達質粒，為進一步研究STAT6與PSF結合的PSF的功能位點提供有力工具。第二部分，用染色質免疫共沉淀的方法驗證PSF是否影響STAT6與靶基因Igε啟動子結合的能力后，用western blotting檢測PSF對組蛋白H3乙酰化修飾水平的影響。
　　 結果：①PSF通過STAT6-TAD與STAT6在細胞內直接結合。并成功構建