白細胞炎性遷移抑制劑活體篩選及其分子機制研究.pdf

1、免疫細胞的炎性遷移參與了許多人類的免疫相關疾病的進展過程，因此尋找抑制免疫細胞炎性遷移的小分子藥物以及研究其調控機制對于免疫相關疾病的治療具有重要的意義。轉基因斑馬魚系
　　TG:(zlyz-GFP)以綠色熒光蛋白特異性標記斑馬魚體內的白細胞，在轉基因斑馬魚胚胎尾部靠近末梢循環(huán)處切一個傷口后的六小時之內，可以觀察到一定數目的熒光陽性細胞在傷口處的聚集。此活體炎性遷移模型由于可視且可量化，非常適合用于炎性細胞遷移的機制探尋以及小分子

2、藥物篩選等。大麻堿Ⅱ型受體CB2或Cnr2（cnr2）對于免疫細胞遷移的調控作用已被廣泛研究，但其調控機制尚不明確。我們利用轉基因斑馬魚系TG:(zlyz-GFP)進行了一次大規(guī)模的小分子化合物篩選，從中篩選得到大麻堿受體激動劑與5-磷脂合酶（5-LO或alox5）抑制劑均能有效抑制斑馬魚白細胞的炎性遷移。并且篩選得到的小分子均能有效抑制人THP-1細胞系的體外趨化性遷移。我們還利用鋅指合酶技術建立了cnr2基因突變的斑馬魚系。cnr2

3、突變的斑馬魚胚胎中白細胞的炎性遷移顯著增加，而敲低Alox5表達后巨噬細胞的炎性遷移被明顯抑制。進一步的機制研究結果表明，Cnr2與Alox5具有通路上的相關性，并且alox5的轉錄直接受轉錄因子c-Jun調控。Cnr2受體受其激動劑激動后抑制JNK/c-Jun的磷酸酶活性從而抑制alox5基因的表達。因此我們的研究結果表明Cnr2通過JNK通路調控alox5基因的表達，從而調控白細胞的炎性遷移。而Cnr2激動劑與Alox5抑制劑合用時