牛泡沫病毒正調(diào)控蛋白BTas調(diào)節(jié)細(xì)胞NF-κB信號通路研究.pdf

1、牛泡沫病毒(Bovine Foamy Virus)屬反轉(zhuǎn)錄病毒科泡沫病毒亞科泡沫病毒屬，在體外雖可使細(xì)胞發(fā)生強(qiáng)烈病變，在體內(nèi)卻不表現(xiàn)任何病癥。該病毒基因組中存在兩類啟動子，其中LTR啟動結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)，內(nèi)部啟動子IP啟動病毒輔助蛋白的表達(dá)，基因轉(zhuǎn)錄需要這兩個啟動子的協(xié)同作用。反式激活因子BTas可上調(diào)兩類啟動子的活性。 本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，BTas通過與其在啟動子上的應(yīng)答元件相結(jié)合實(shí)現(xiàn)其對啟動子的激活。同時我們也發(fā)現(xiàn)，當(dāng)LTR

2、上兩個TRE區(qū)域同時缺失時，雖然BTas對其激活明顯下降，但與對照組相比仍有激活作用。序列分析結(jié)果表明，殘存序列中存在一個NF-kB因子的潛在結(jié)合位點(diǎn)，因此我們推測BTas可以通過NF-kB信號通路激活BFV LTR。 本文對BTas與NF-kB信號通路關(guān)系進(jìn)行研究。發(fā)現(xiàn)BTas能夠特異性激活只含有kB結(jié)合序列的報告基因，免疫熒光定位分析顯示BTas能夠?qū)е聀65-NF-kB因子的核轉(zhuǎn)位，證明BTas激活了NF-kB信號通路。進(jìn)

3、一步對其機(jī)制進(jìn)行探索，發(fā)現(xiàn)BTas可以誘導(dǎo)NF-kB抑制蛋白IkBa的磷酸化，該蛋白的磷酸化位點(diǎn)突變體以及IKK激酶突變體均能夠有效的抑制BTas對kB報告基因的激活作用，表明BTas的激活作用需要IKK引發(fā)的磷酸化作用。利用IKK上游激酶的失活突變體，我們證明BTas對NF-kB的激活作用與TRAF6相關(guān)。此外，我們證明病毒感染也能激活只含有kB結(jié)合序列的報告基因。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明BTas確實(shí)可通過經(jīng)典途徑，活化IKK、促進(jìn)IkBa的