Cathepsin L通過調節(jié)NF-κB信號通路影響腫瘤細胞輻射敏感性.pdf

1、目的：研究在X射線作用后人膠質瘤細胞系U251和人乳腺癌細胞系MCF-7細胞中溶酶體組織蛋白酶L(Cathepsin L，CTSL)的表達及其在電離輻射誘導的轉錄因子NF-κB的激活過程中的作用，進一步探討Cathepsin L對腫瘤細胞放射敏感性的影響及其可能機制。
　　方法：在已建立的U251細胞和MCF-7細胞體外培養(yǎng)體系的基礎上，分別構建穩(wěn)定低表達Cathepsin L穩(wěn)定低表達NF-κB的U251和MCF-7細胞株，用X

2、射線和/或Cathepsin L特異性抑制劑Z-FY-CHO處理細胞，采用Western Blot法檢測各處理組中細胞Cathepsin L蛋白的表達和NF-κB的核轉位水平，免疫熒光法檢測各處理組細胞中的NF-κB的胞內分布情況，雙熒光素酶報道基因法測定各處理組中NF-κB調節(jié)基因轉錄活性的改變，染色質免疫共沉淀（ChIP）法顯示NF-κB入核后參與調節(jié)下游靶基因的轉錄激活水平，堿性彗星試驗反映輻射后DNA的損傷修復情況；克隆形成實驗

3、檢測各處理組細胞的輻射敏感性差異。
　　結果：X射線可誘導U251和MCF-7細胞中Cathepsin L活性片段表達及NF-κB核轉位水平的升高。Western Blot、免疫熒光和熒光素酶報告基因檢測顯示，通過不同方法抑制Cathepsin L后，X射線誘導的NF-κB激活受到一定程度的阻滯。ChIP結果顯示抑制Cathepsin L后，X射線誘導的NF-κB與靶基因cyclin D1和ATM啟動子的結合水平也相應降低。同時，

4、Cathepsin L表達被抑制后再經X射線處理的U251和MCF-7細胞與單純X射線處理的細胞相比克隆形成率降低。進一步建立穩(wěn)定低表達NF-κB p65亞基的細胞株進行堿性彗星實驗和克隆形成實驗，結果顯示X射線作用后低表達p65的細胞的DNA損傷不易被修復，克隆形成率明顯降低，而使用Cathepsin L處理不能增加細胞的輻射敏感性。
　　結論：Cathepsin L在一定程度上參與了X射線對NF-κB的激活，抑制Catheps