腫瘤相關巨噬細胞通過NF-κB通路促進食管癌細胞遷移侵襲.pdf

1、目的：
　　食管癌是世界上常見的惡性腫瘤之一，位列癌癥死亡病因的第6位。食管癌患者就診時常常并發(fā)腫瘤侵襲轉移，這也是食管癌致死率居高不下的原因之一。腫瘤微環(huán)境與腫瘤侵襲轉移存在密切聯(lián)系，而M2型巨噬細胞是腫瘤微環(huán)境的主要構成成分，稱之為腫瘤相關巨噬細胞（TAMs），能促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在胃癌、乳腺癌和口腔鱗癌等腫瘤當中都已證實TAMs與腫瘤細胞的分化生長侵襲轉移成正相關，與預后成負相關。已有研究表明在食管癌組織中巨噬細胞浸潤密度

2、較癌旁正常組織明顯增加，但其對食管癌的具體作用機制未見闡明。另一方面，核轉錄因子κB（NF-κB）可以通過調控鈣黏蛋白、MMPs等粘附因子促進腫瘤細胞的遷移侵襲。因此，本實驗將探討TAMs對食管癌侵襲轉移的影響和分子機制，以及NF-κB在其中的地位，為臨床食管癌治療提供潛在的靶點及新的理論依據。
　　方法：
　?、庞煤?0％胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的RMPI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人單核細胞株THP-

3、1。用含10%胎牛血清、100U/ml鏈霉素和100U/ml青霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)人食管鱗癌細胞株EC109。⑵采用佛波酯（PMA）和IL-4體外刺激THP-1，誘導分化為M2型巨噬細胞，觀察細胞形態(tài)學改變，用流式細胞術檢測巨噬細胞膜分子CD204和CD206的表達，鑒定M2型巨噬細胞是否誘導成功。⑶設空白對照組、TAMs組、BAY11-7082（NF-κB抑制劑）處理組、BAY11-7082處理+TAMs組，用transwell小

4、室及BD Matrigel Invasion Chamber小室分別檢測TAMs及經NF-κB抑制劑預處理對食管癌細胞遷移、侵襲能力的影響。⑷設空白對照組、TAMs共培養(yǎng)組、BAY11-7082處理組、BAY11-7082處理組+TAMs共培養(yǎng)組，用 western blot檢測 TAMs共培養(yǎng)及經 NF-κB抑制劑預處理對食管癌細胞NF-κB、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2及MMP-9蛋白表達水平的影響。

5、>　　結果：
　?、賂HP-1細胞經PMA和IL-4刺激后，細胞貼壁成簇生長，部分細胞伸出偽足，CD204和CD206表達增加，說明M2型巨噬細胞(TAMs)誘導成功。②TAMs可促進食管癌細胞株EC109的遷移和侵襲能力，而BAY11-7082逆轉了TAMs的作用。③TAMs可上調EC109細胞的NF-κB蛋白表達，BAY11-7082可阻斷該作用。④TAMs可誘導EC109細胞N-cadherin、MMP-2、MMP-9的蛋白