哈薩克族食管鱗癌甲基化基因及其病理學意義的研究.pdf

1、目的：篩選哈薩克族食管鱗癌甲基化基因，并研究其病理學意義。
　　方法：在細胞水平，采用人類全基因組寡核苷酸微陣列芯片，熒光雙交換法檢測5-雜氮-2’-脫氧胞苷（5-aza-CdR）干預的食管鱗癌細胞Eca109與正常培養(yǎng)的Eca109細胞中的差異表達基因，通過甲基化特異性PCR（MSP）和實時熒光定量PCR（qRT-PCR）分別驗證其甲基化狀態(tài)和表達量變化；在組織水平，選取18對哈薩克族食管鱗癌組織樣本，通過MSP和qRT-PCR

2、進一步驗證細胞水平篩選出的高度甲基化基因的甲基化狀態(tài)和表達量變化，并分析其與哈薩克族食管鱗癌患者臨床病理參數(shù)的相關性。
　　結果：經(jīng)5-aza-CdR干預的Eca109細胞形態(tài)發(fā)生改變，細胞密度降低，細胞間接觸變松，細胞體積增大，細胞內可見大量空泡，呈凋亡形態(tài)，存活細胞數(shù)減少?；蛐酒Y選獲得384個差異表達基因，其中303個基因表達上調，81個基因表達下調；表達上調基因中，組織因子途徑抑制物-2（TFPI2）基因表達上調11.4

3、2倍，在Eca109細胞中，重復驗證的MSP結果顯示：正常培養(yǎng)組甲基化陽性，干預組非甲基化陽性；其啟動子區(qū)甲基化陽性率在哈薩克族食管鱗癌組織中為45％。TFPI2基因表達量在細胞水平和哈薩克族食管鱗癌組織均有顯著差異（p＜0.05）。A激酶錨定蛋白12（AKAP12）基因表達上調4.05倍，但其啟動子區(qū)甲基化在食管鱗癌發(fā)生率均較低，在細胞水平和哈薩克族食管鱗癌組織表達量無統(tǒng)計學差異。TFPI2基因表達量及甲基化均與哈薩克族食管鱗癌組織的