格爾德霉素及其與順鉑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人卵巢癌細(xì)胞SKOV3作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究格爾德霉素（Geldanamycin，GA）及其與抗癌藥物順鉑（DDP）聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人卵巢癌細(xì)胞SKOV3的體外抑制作用，分析格爾德霉素抑制SKOV3細(xì)胞的增殖及誘導(dǎo)其凋亡的可能機(jī)制，探討格爾德霉素用于卵巢癌臨床治療的可行性。
　　 方法：
　　 1.體外培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞SKOV3，采用四甲基偶氮唑藍(lán)（tetrzolium-based colorimetric assay，MTT）比色法檢測格爾德霉素對(duì)該細(xì)胞增殖

2、的影響。
　　 2.格爾德霉素作用48后，采用Giemsa染色顯微鏡觀察SKOV3細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變及流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測細(xì)胞周期及凋亡率的變化。
　　 3.免疫細(xì)胞化學(xué)法（immunocytochemistory，ICC）檢測格爾德霉素處理48小時(shí)后SKOV3細(xì)胞內(nèi)Akt及raf-1蛋白的表達(dá)情況。
　　 4.流式細(xì)胞術(shù)分析格爾德霉素處理SKOV3細(xì)胞48后Akt、raf-1蛋白的

3、表達(dá)水平。
　　 5.MTT比色法檢測格爾德霉素與順鉑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖的抑制作用，采用金氏公式[1]分析相互作用指數(shù)（Interaction Index），評(píng)價(jià)兩藥聯(lián)合應(yīng)用后的作用，如相互作用指數(shù)>0.85表示相加作用，相互作用指數(shù)<0.85為拮抗作用。
　　 結(jié)果：
　　 1.不同濃度的格爾德霉素（20、40、200、400、2000nmol/L）對(duì)SKOV3細(xì)胞的增殖均可產(chǎn)生抑制作用，且格爾德霉素

4、對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖的抑制作用呈明顯的時(shí)間一劑量依賴關(guān)系，最大抑制率可達(dá)（74.72±3.16）％。GA作用48h后的IC50為496.57nmol/L。
　　 2.經(jīng)20、40、200、400、2000nmol/L的格爾德霉素作用48h后SKOV3細(xì)胞，隨著藥物濃度的增大，G2/M期細(xì)胞逐漸增多，該作用呈劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系。不同濃度組格爾德霉素均誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其凋亡率與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　

5、 3.光學(xué)顯微鏡下觀察未經(jīng)格爾德霉素作用的對(duì)照組SKOV3細(xì)胞呈長梭形或菱形，形態(tài)飽滿：而經(jīng)格爾德霉素作用48h后的SKOV3細(xì)胞皺縮，破裂，呈不規(guī)則形，有的細(xì)胞兩端出現(xiàn)細(xì)長的偽足，細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)空泡，脫落細(xì)胞增多。經(jīng)Giemsa染色光學(xué)顯微鏡下顯示，對(duì)照組SKOV3細(xì)胞呈長梭形或菱形，形態(tài)飽滿，細(xì)胞核染色均勻，核仁清晰可見，未見凋亡細(xì)胞出現(xiàn)；而經(jīng)格爾德霉素作用48h后的SKOV3細(xì)胞變圓，胞質(zhì)濃縮，核著色不均勻，出現(xiàn)核分裂現(xiàn)象，呈現(xiàn)凋

6、亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。
　　 4.免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測顯示，經(jīng)0、20、200、2000nmol/L格爾德霉素處理48小時(shí)后，SKOV3細(xì)胞中Akt、raf-1蛋白的表達(dá)隨藥物濃度增大而逐漸降低。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果同樣顯示.Akt、raf-1蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.05）。
　　 5.MTT結(jié)果顯示格爾德霉素與順鉑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)SKOV3細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用。20、40、200、400nmol/L的格爾德霉素聯(lián)合順鉑對(duì)S

7、KOV3細(xì)胞增殖的抑制作用隨濃度的增加逐漸增強(qiáng)。金氏公式分析相互作用指數(shù)，計(jì)算結(jié)果顯示不同濃度的順鉑聯(lián)合不同濃度的格爾德霉素相互作用指數(shù)均>0.85。
　　 結(jié)論：
　　 1.格爾德霉素對(duì)人卵巢癌細(xì)胞SKOV3的增殖具有明顯的抑制作用，為卵巢癌的臨床治療提供了一種新的手段。
　　 2.格爾德霉素抑制SKOV3細(xì)胞增殖的作用呈明顯的時(shí)間一劑量依賴關(guān)系。
　　 3.格爾德霉素可使SKOV3細(xì)胞阻滯于G2/M期