面神經(jīng)損傷修復(fù)機(jī)制研究.pdf

1、第一部分 面神經(jīng)斷傷吻合后面部運(yùn)動功能恢復(fù)的實驗研究 目的觀察大鼠面神經(jīng)損傷修復(fù)后的行為學(xué)、功能學(xué)恢復(fù)過程，為面神經(jīng)損傷修復(fù)研究提供客觀的實驗性功能評估手段。方法大鼠面神經(jīng)斷傷吻合建立外傷性面癱模型，術(shù)后每周觀察觸須拂動、角膜吹氣誘發(fā)的瞬目動作等面部運(yùn)動，記錄健患兩側(cè)面神經(jīng)電圖(ENoG)與瞬目反射(BR)的變化。結(jié)果術(shù)后患側(cè)觸須拂動與瞬目動作消失，但立即出現(xiàn)觸須細(xì)微的顫抖，術(shù)后1月左右面部運(yùn)動開始恢復(fù)，2月時可出現(xiàn)耳周

2、肌肉的聯(lián)帶運(yùn)動。ENoG檢測發(fā)現(xiàn)，傷后患側(cè)復(fù)合肌肉動作電位(CAMP)仍可引出，術(shù)后21天時潛伏期開始延長，1月時達(dá)高峰并開始恢復(fù)，3-4月后基本穩(wěn)定但仍不能恢復(fù)至健側(cè)正常水平，其中21-63天時延長的潛伏期值與其它各時間點相比差異有顯著性(P＜0.05)?；紓?cè)CAMP的振幅與刺激強(qiáng)度變化無明顯規(guī)律性，潛伏期、振幅與刺激強(qiáng)度三值間也無相關(guān)性。BR檢測發(fā)現(xiàn)，患側(cè)R1波在術(shù)后7、14天時消失，1月后恢復(fù)檢出，術(shù)后2月左右同側(cè)口輪匝肌處可以記

3、錄到提示聯(lián)帶運(yùn)動的R1樣肌電反射波(R1oris)，R1oris與同時記錄的R1潛伏期值呈一致性下降趨勢，2月時的R1oris潛伏期值與此后各時點值間的差異有顯著性。結(jié)論神經(jīng)電圖和瞬目反射的檢測方法有助于反映面癱模型大鼠的面部行為學(xué)恢復(fù)過程，但仍有待于進(jìn)一步研究完善。 第二部分 損傷修復(fù)過程中面運(yùn)動神經(jīng)元定位分布變化研究 目的觀察面神經(jīng)斷傷吻合后再生修復(fù)過程中，面運(yùn)動神經(jīng)元的定位分布與再生達(dá)靶支配變化，探討其在聯(lián)

4、帶等面癱后遺癥發(fā)生中的可能作用。方法建立大鼠面神經(jīng)斷傷吻合模型，采用尼氏染色與神經(jīng)逆行熒光示蹤技術(shù)，觀察術(shù)后60、90與120天時健患兩側(cè)面運(yùn)動神經(jīng)元的定位分布與再生支配變化。結(jié)果(1)傷后健側(cè)尼氏染色與熒光金(FG)逆行示蹤標(biāo)記的面運(yùn)動神經(jīng)元分布特征與數(shù)量無變化。而患側(cè)代表成功再生達(dá)靶的FG標(biāo)記神經(jīng)元數(shù)目較尼氏染色標(biāo)記的神經(jīng)元數(shù)目明顯減少(P＜0.05)，術(shù)后60、90與120天時FG標(biāo)記的神經(jīng)元數(shù)目變化不明顯。健患兩側(cè)尼氏染色神經(jīng)元

5、的數(shù)量及分布特征基本一致，僅有神經(jīng)元分布區(qū)域的輕微縮小趨勢，未發(fā)現(xiàn)傷后神經(jīng)元有壞死與調(diào)亡表現(xiàn)。(2)FG與熒光紅(FR)神經(jīng)逆行雙標(biāo)發(fā)現(xiàn)，面神經(jīng)的顳支主要由背側(cè)亞核區(qū)運(yùn)動神經(jīng)元支配，以背內(nèi)、外側(cè)亞核為主；頰支則主要由各中間亞核、外側(cè)亞核及少部分背外側(cè)亞核支配，健患兩側(cè)頰支支配區(qū)內(nèi)均可見支配顳支的錯位神經(jīng)元存在，其分別占同側(cè)示蹤神經(jīng)元總數(shù)的比例之間差異無顯著性(P＞0.05)，提示雜亂再生的熒光雙標(biāo)記神經(jīng)元僅出現(xiàn)于患側(cè)。結(jié)論面神經(jīng)損傷修復(fù)

6、晚期，可能存在再生達(dá)靶不成功但仍處于存活狀態(tài)的運(yùn)動神經(jīng)元，這類的神經(jīng)元結(jié)構(gòu)與功能意義值得深入研究。在面神經(jīng)損傷修復(fù)與后遺癥產(chǎn)生機(jī)制中，除有軸索過度芽生與錯靶支配可能外，面神經(jīng)核高興奮性、假突觸傳遞等的作用也有待研究證實。 第三部分 損傷修復(fù)過程中面運(yùn)動神經(jīng)元興奮性調(diào)控的塑形改變 目的觀察面神經(jīng)損傷修復(fù)過程中，面運(yùn)動神經(jīng)元突觸傳入與神經(jīng)遞質(zhì)受體的塑形改變，探討其在傷后面神經(jīng)核運(yùn)動信息調(diào)控中的可能作用。方法建立大鼠面

7、神經(jīng)斷傷吻合模型，術(shù)后0、7、21、60天時，分別用免疫組織化學(xué)與RT-PCR技術(shù)，觀察面神經(jīng)核內(nèi)突觸體素(p38)、谷氨酸神經(jīng)遞質(zhì)受體亞單位(NMDAR2A與GluR2)的表達(dá)變化，同時用透射電鏡技術(shù)觀察術(shù)后90天時面運(yùn)動神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)改變與突觸數(shù)量變化。結(jié)果面神經(jīng)核內(nèi)代表突觸活性與數(shù)量的p38表達(dá)于面運(yùn)動神經(jīng)元胞體與樹突結(jié)構(gòu)上，傷后患側(cè)的免疫反應(yīng)強(qiáng)度明顯減弱(p＜0.05)，7天時最低，21天后有輕微升高。面神經(jīng)核區(qū)腦組織內(nèi)可檢測

8、出NMDAR2A與GluR2的mRNA表達(dá)，兩者表現(xiàn)出不同的表達(dá)強(qiáng)度變化，前者在傷側(cè)的表達(dá)水平顯著降低(p＜0.05)，而后者無顯著性變化(p＞0.05)。超微結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn)面運(yùn)動神經(jīng)元無壞死與凋亡樣結(jié)構(gòu)改變，但其突觸結(jié)構(gòu)的數(shù)量減少。結(jié)論面神經(jīng)損傷修復(fù)過程中，面運(yùn)動神經(jīng)元的突觸傳入末梢出現(xiàn)相應(yīng)塑形改變，谷氨酸神經(jīng)遞質(zhì)受體組成也呈現(xiàn)不同的表達(dá)改變，從而適應(yīng)傷后面運(yùn)動神經(jīng)元興奮性的改變，并可能直接影響面神經(jīng)功能恢復(fù)并導(dǎo)致面癱等后遺癥的發(fā)生。

9、 第四部分 面神經(jīng)損傷修復(fù)過程中星形膠質(zhì)細(xì)胞塑形活動研究 目的觀察面神經(jīng)損傷修復(fù)過程中面運(yùn)動神經(jīng)元周圍星形膠質(zhì)細(xì)胞塑形活動。方法大鼠面神經(jīng)斷傷吻合后0、7、21、60天時，觀察面部運(yùn)動恢復(fù)變化同時，分別用免疫組織化學(xué)、神經(jīng)逆行示蹤結(jié)合免疫熒光組織化學(xué)的雙重標(biāo)記技術(shù)以及透射電鏡技術(shù)，觀察外周損傷后面神經(jīng)核內(nèi)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)、連接蛋白(Cx43與Cx32)表達(dá)以及星形膠質(zhì)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果面神經(jīng)損傷

10、修復(fù)過程中面部運(yùn)動功能逐漸恢復(fù)，但難以完全恢復(fù)正常，且常伴有面癱后遺癥聯(lián)帶。熒光金(FG)逆行示蹤標(biāo)記的面運(yùn)動神經(jīng)元具有明顯的亞區(qū)分布特征。正常狀態(tài)下面神經(jīng)核區(qū)GFAP表達(dá)強(qiáng)度極弱，術(shù)后7天時患側(cè)表達(dá)強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，至再生修復(fù)晚期減弱，但仍高于健側(cè)水平。Cx43表達(dá)于星形膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元，而Cx32則主要表達(dá)于神經(jīng)元內(nèi)。面神經(jīng)損傷后，患側(cè)Cx43/32的表達(dá)強(qiáng)度均較健側(cè)增高，以Cx43為明顯，21天后表達(dá)強(qiáng)度開始降低。超微結(jié)構(gòu)觀察表明，術(shù)