脂肪間充質干細胞與自體髓核細胞共培養(yǎng)中相互作用分子機制初步研究.pdf

1、目的：低氧環(huán)境下，通過非細胞接觸共培養(yǎng)自體髓核細胞與脂肪間充質干細胞，探討髓核細胞與脂肪間充質干細胞間旁分泌下相互作用，為椎間盤退變性疾病的細胞移植治療提供新的細胞來源。
　　 方法：①250g 雄性SD大鼠斷頸處死，取腹股溝脂肪墊處脂肪，0.1％膠原酶消化，體外接種培養(yǎng)，采用極限稀釋法純化細胞。②利用流式細胞技術對細胞表面標記進行鑒定(Sca-1，CD44，CD45，CD11b)。③低氧環(huán)境下，自體髓核細胞與脂肪間充質干細胞按

2、不同比率共培養(yǎng)。脂肪間充質干細胞在藻酸鹽中培養(yǎng)，髓核細胞在培養(yǎng)皿底部培養(yǎng)。④兩周后，細胞記數(shù)板檢測髓核細胞增殖數(shù)量、RT-PCR檢測髓核外基質表達；同時免疫組化和RT-PCR檢測脂肪間充質干細胞外基質表達。
　　 結果：①共培養(yǎng)后，髓核細胞增殖明顯，少量脂肪間充質干細胞作用髓核細胞即出現(xiàn)明顯增殖；同時髓核細胞活性增強，細胞外基質Ⅱ型膠原蛋白（Collagen Ⅱ）、聚焦蛋白聚糖（aggrecan）合成增加，差別具有統(tǒng)計學意義（P

3、﹤0.01）。②免疫染色顯示脂肪間充質干細胞外基質出現(xiàn)Collagen Ⅱ。RT-PCR結果證實，脂肪間充質干細胞中髓核細胞標志基因和軟骨細胞標志基因的表達，實驗組明顯高于對照組，差別具有統(tǒng)計學意義（P﹤0.01）。
　　 結論：本實驗初步探討了自體髓核細胞與脂肪間充質干細胞間相互作用機制：①髓核細胞能促進脂肪間充質干細胞向髓核樣細胞分化，且分化效率與髓核細胞數(shù)量相關；②脂肪間充質干細胞能促進髓核細胞增殖，同時恢復退變髓核細胞活