單核趨化因子蛋白1基因(mcp-1)及脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2基因(lcn2)對(duì)肝癌細(xì)胞株BEL-7402的作用.pdf

1、單核趨化因子蛋白1(Monocyte chemoattractant protein1，mcp-1)屬于趨化因子CC亞族成員，能通過與單核類趨化因子受體(CCR2)結(jié)合并誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞等的激活、分化、發(fā)育等，參與血管再生過程，對(duì)腫瘤的抑制起作用；脂質(zhì)運(yùn)載蛋白-2(lipocalin-2，lcn2)為脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族，被多種類型的細(xì)胞表達(dá)，參與多種生理活動(dòng)，如細(xì)胞凋亡、增殖以及分化，免疫炎癥反應(yīng)等。mcp-1和lcn2基因均能通過調(diào)控凋亡相

2、關(guān)基因(如Bax、Bc1-2等)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，且可作為急性。腎臟損傷的生物標(biāo)記物。為了研究mcp-1和lcn2基因在肝癌細(xì)胞BEL-7402中的作用，在本實(shí)驗(yàn)室成功克隆mcp-1和lcn2基因并構(gòu)建其表達(dá)載體和干涉載體的基礎(chǔ)上，本文通過采用脂質(zhì)體法將構(gòu)建的表達(dá)載體pEGFP-N1-mcp-1、pEGFP-N1-lcn2及其對(duì)照pEGFP-N1、干涉載體pGenesil-1.0-mcp-1(255)、pGenesil-1.0-lcn2(2

3、92)及其對(duì)照pGenesil-1.0-HK轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞BEL-7402，并用G418篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的單克隆細(xì)胞，并進(jìn)行下列檢測(cè)，采用活體觀察和HE染色進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察；通過細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT法進(jìn)行生長(zhǎng)曲線的測(cè)定；通過PCNA免疫組化檢測(cè)細(xì)胞增殖；通過Hoechst33258染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡；通過甲基纖維素成集落率實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的惡性增殖程度；藥物MTT法檢測(cè)細(xì)胞的耐藥性。
　　結(jié)果表明：轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-mcp-1的細(xì)胞形態(tài)與B

4、EL-7402細(xì)胞無明顯變化，但細(xì)胞核質(zhì)比變??；生長(zhǎng)曲線顯示轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-mcp-1的細(xì)胞增殖比轉(zhuǎn)染pEGFP-N1的細(xì)胞慢；PCNA檢測(cè)顯示mcp-1抑制細(xì)胞增殖;Hoechst33258凋亡染色顯示mcp-1不引起細(xì)胞凋亡；甲基纖維素成集落率檢測(cè)顯示mcp-1能抑制BEL-7402細(xì)胞的惡性增殖程度。轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-lcn2的細(xì)胞細(xì)胞核固縮變小，核仁減少：生曲線顯示轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-lcn2的細(xì)胞生長(zhǎng)明顯降低；PC

5、NA檢測(cè)顯示lcn2明顯抑制細(xì)胞增殖；Hoechst33258凋亡染色顯示lcn2能引起細(xì)胞凋亡；甲基纖維素成集落率檢測(cè)顯示lcn2明顯抑制BEL-7402細(xì)胞的惡性增殖程度；藥物MTT檢測(cè)則發(fā)現(xiàn)，lcn2基因?qū)Π被嵫苌風(fēng)-4-氟苯丙氨酸(Fp)和L-4-氯苯丙氨酸(Clp)無明顯的耐藥性。
　　綜上所述，mcp-1基因能抑制肝癌細(xì)胞BEL-7402的細(xì)胞增殖，降低其惡性增殖程度，但對(duì)肝癌細(xì)胞BEL-7402的細(xì)胞凋亡作用不明