他克莫司膠囊人體藥代動力學(xué)及生物等效性研究.pdf

1、建立人全血中他克莫司的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測法(HPLC-ESI-MS/MS)，研究他克莫司人體藥動力參數(shù)，并評價他克莫司膠囊的相對生物利用度和生物等效性。 方法： 參考文獻方法，改良建立了精確、靈敏、重現(xiàn)性和專一性好的LC-MS/MS分析法。全血樣品經(jīng)溶血后，取100μL血樣加入10μL內(nèi)標(環(huán)孢霉素D)和150μL氟化鈉溶液，混勻；再加入1mL乙醚提取，有機相用氮氣吹干，殘渣用100μL70％乙腈水溶液重組，轉(zhuǎn)移

2、至進樣瓶，進樣10μL供LC-MS/MS分析。色譜條件：ThermoHypersilSilica分析柱(150×2.1mm，5μm)，乙腈-水(含20mM醋酸銨和0.1％甲酸)為流動相(98:2，v/v)，流速0.3mL/min，進樣量10μL。質(zhì)譜條件：電噴霧離子源，正離子掃描，MRM掃描分析，F(xiàn)K506和IS的離子選擇通道分別為821.5→768.4amu和1233.8→)1216.7amu。 健康志愿者22名，隨機雙交叉單

3、劑量口服杭州中美華東制藥有限公司研制的他克莫司膠囊(受試制劑，T)和日本藤澤制藥有限公司(愛爾蘭廠)生產(chǎn)的普樂可復(fù)膠囊(參比制劑，R)，劑量均為5mg，劑間間隔為2周。分別于服藥后72h內(nèi)多點抽取靜脈血；用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定血漿中他克莫司的濃度。用DAS程序計算藥動力學(xué)參數(shù)和相對生物利用度并評價兩種制荊生物等效性。AUC(0-72)，AUC(0-∞)和Cmax經(jīng)方差分析和雙單側(cè)t檢驗，Tmax進行秩和檢驗。 結(jié)果：

4、 血漿濃度在0.20～100.0ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9991)；LLOQ(0.20ng/mL)的精密度和準確度為9.84％和96.2％。低(0.30ng/mL)、中(15.0ng/mL)、高(80.0ng/mL)濃度的批內(nèi)精密度、準確度分別為1.17-9.47％和89.3-109.5％；批間精密度和準確度分別為1.37-4.17％和93.4-107.9％。低、中、高濃度的FK506和內(nèi)標的平均回收率分別為71.68

5、％、65.65％、65.69％和73.58％。穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明，血樣品經(jīng)過3次凍融，仍保持穩(wěn)定；待測樣品在自動進樣器中至少能夠保持12h穩(wěn)定。 單劑量口服他克莫司受試制劑和參比劑后，血漿中FK506的Cmax分別為(49.41±22.21)ng/mL和(41.30±19.63)ng/mL；Tmax分別為(1.20±0.40)h和(1.70±0.77)h；AUC(0-72)分別為(366.996±191.246)ng·h/mL和

6、(330.274±143.473)ng·h/mL；AUC(0-∞)分別為(437.017±239.350)ng·h/mL和(394.944±186.339)ng·h/mL。 試驗制劑和參比制劑間無顯著差異(p>0.05)；Cmax的90％可信區(qū)間為(97.1-142.3)％，AUC(0-72)的90％可信區(qū)間為(86.0-124.4)％，AUC(0－∞)的90％可信區(qū)間為(84.5-123.4)％；試驗制劑與參比制劑的人體相對生