載脂蛋白A-Ⅰ在機體急性相反應中對中性粒細胞功能的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、本實驗的研究內(nèi)容主要包括兩個方面:一、研究血漿高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein,HDL)在內(nèi)毒素(endotoxin)誘導的急性相反應(acute phaseresponse,APR)中其組分的改變:二、重點研究載脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,apoA-Ⅰ)對趨化寡肽(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,f-MLP)以及佛波酯(phorbol

2、myristate acetate,PMA)激活的中性粒細胞(polymorphonuclearleukocyte,PMN)功能的影響。本實驗采用革蘭氏陰性菌內(nèi)毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)在家兔體內(nèi)誘導APR作為研究對象,觀察APR發(fā)展過程中兔血漿HDL的改變,尤其是apoA-Ⅰ的變化,為APR過程中apoA-Ⅰ由HDL顆粒中釋放出來并發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的可能性提供實驗基礎。雄性新西蘭兔,2.2～2.5kg,

3、靜脈注射LPS1.0mg/kg誘導APR,于APR不同時相采集血樣:①超離心制備兔血漿HDL(d=1.063～1.21g/mL),以分子篩色譜分析其分子大小的改變,通過變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE),凝膠圖像分析以及ELISA等實驗手段分析其蛋白成分的變化;②8％PEG-6000化學沉淀法分離血漿HDL,測定膽固醇和三酰甘油含量的變化。超離心制備的兔

4、血漿HDL經(jīng)過乙醇/乙醚法脫脂得到HDL載脂蛋白(apolipoproteins of HDL,apoHDL),apoHDL經(jīng)高效灌注色譜儀陰離子交換樹脂分離apoHDL各組分,收集各組分峰,超濾離心脫鹽濃縮后以SDS-PAGE鑒定各峰蛋白成分,收集純apoA-Ⅰ,用于PMN功能研究。肝素抗凝無菌新鮮兔血,采用梯度離心法分離純化PMN:PBS稀釋(1:1)的兔抗凝全血小心添加至淋巴細胞分離液(d=1.077g/mL)上層(v/v,1:1