NMDA受體在中性粒細胞與內皮細胞相互粘附中的調節(jié)作用.pdf

1、目的：谷氨酸(glutamate，Glu)是中樞神經系統(tǒng)重要的興奮性神經遞質，在哺乳動物中樞神經系統(tǒng)中廣泛分布并在包括學習、記憶、腦的發(fā)育以及突觸可塑性等方面發(fā)揮重要作用，Glu過度激活其受體所引起的興奮性神經毒性在神經損傷的發(fā)生中也有重要地位。研究發(fā)現谷氨酸NMDA受體在外周有廣泛表達，推測其在外周組織中有重要的生理和病理意義。本研究在本實驗室早期發(fā)現NMDA受體阻斷劑MK-801可以減輕內毒素肺損傷的基礎上，觀察NMDA對中性粒細胞

2、與內皮細胞粘附的影響，并對其可能機制進行研究，論證NMDA受體的激活可通過促進中性粒細胞與內皮細胞相互粘附而加重肺內炎癥過程的假說，為臨床急性肺損傷防治的研究提供新的靶點。 方法：采取新鮮人全血分離中性粒細胞和人臍靜脈內皮細胞ECV304的培養(yǎng)，采用不同濃度(10<'-9>～10<'-3>)NMDA分別處理中性粒細胞和內皮細胞，觀察中性粒細胞與人臍靜脈內皮細胞的粘附變化。分別采用免疫細胞化學、Westem Blot以及RT一PC

3、R的方法觀察NMDA受體一型亞基(NMDA receptor l，NMDARl)在中性粒細胞和內皮細胞的表達。以流式細胞術觀察NMDA處理后中性粒細胞粘附分子CDllb／CDl8的表達變化。 結果：1．RT—PCR證實，在內皮細胞和中性粒細胞中均存在NMDA 受體NMDARl亞基的mRNA表達。采用Westem Blot證明內皮細胞和中性粒細胞均存在NMDARl受體亞基的蛋白表達，但中性粒細胞的蛋白表達強于內皮細胞。進一步采用免

4、疫細胞化學的方法研究也證實，在中性粒細胞及內皮細胞表面有陽性染色。 2．用不同濃度的NMDA處理中性粒細胞4小時后，將中性粒細胞與臍靜脈內皮細胞ECV304共培養(yǎng)2小時，與正常對照組比較，中性粒細胞與內皮細胞的粘附變化率在較低劑量(10<'-9>～10<'-6>mol／L)時隨NMDA濃度而升高，而劑量高于10<'-6>mol／L時則隨NMDA濃度的升高而降低，在10<'-6>mol／L濃度達到最高粘附變化率(p<0.01)。較

5、高劑量時測定中性粒細胞培養(yǎng)上清LDH活性顯示細胞損傷情況隨NMDA濃度升高而升高，當NMDA濃度>l0<'-5>mol／L時，中性粒細胞培養(yǎng)上清LDH活性與正常對照組比較有顯著增高(p<0.01)。NMDA處理內皮細胞后對中性粒細胞與內皮細胞的粘附變化率無顯著性影響 (P>0.05)3．采用流式細胞術測定顯示，NMDA處理中性粒細胞4小時后細胞表面粘附分子CDllb平均熒光強度高于對照組(p<0.05)。 結論：1．中性粒細胞

6、及ECV304內皮細胞有NMDA受體NMDAR1的表達，但中性粒細胞的NMDAR1蛋白表達強于ECV304內皮細胞。 2．中性粒細胞膜上的NMDA受體激活可以促進中性粒細胞粘附于ECV304內皮細胞表面。內皮細胞上的NMDA受體激活對中性粒細胞與ECV304內皮細胞間相互粘附無明顯影響。 3．NMDA受體激活可以上調中性粒細胞表面粘附分子CDllb表達，介導中性粒細胞與ECV304內皮細胞間粘附。 4．高濃度NM