丹參素、黃芪對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞株(HSC-T6)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響.pdf

1、目的：以轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）刺激大鼠肝星狀細(xì)胞株（HSC-T6）為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，了解丹參素、黃芪對(duì)HSC-T6的TGF-β/TβR/Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用，探討丹參素、黃芪抗肝纖維化的機(jī)制。
　　 方法：丹參素、黃芪作用傳代培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6。MTT法檢測(cè)藥物對(duì)HSC-T6生長(zhǎng)增殖的影響，了解藥物對(duì)TGF-β1刺激的HSC-T6增殖影響；免疫細(xì)胞化學(xué)染色法觀察HSC-T6細(xì)胞株α-SMA的表達(dá)，以及H

2、SC-T6細(xì)胞株Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成；ELISA法觀察Ⅰ、Ⅲ型膠原分泌；HSC-T6細(xì)胞膜上的TβRⅠ、Ⅱ的表達(dá)用間接免疫熒光及Western blot法觀察；RT-PCR法分析丹參素、黃芪和TGF-β1共同作用HSC-T6后，Smad2、3、7mRNA的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：（1）丹參素和黃芪在0.0125mg/ml～0.2mg/ml時(shí)，對(duì)HSC-T6生長(zhǎng)增殖有抑制作用，其強(qiáng)度隨濃度的增加而增強(qiáng)（P<0.01）；丹參素、黃芪對(duì)

3、TGF-β1刺激HSC-T6引起的增殖有明顯的抑制作用，呈劑量依賴性（P<0.01）；丹參素、黃芪最佳濃度為0.0125mg/ml～0.05mg/ml。（2）丹參素、黃芪能減少TGF-β1誘導(dǎo)的α-SMA表達(dá)，下調(diào)Ⅰ、Ⅲ型膠原合成和分泌（P<0.01）。（3）丹參素、黃芪能下調(diào)HSC-T6細(xì)胞膜上TβRⅠ、Ⅱ的表達(dá)，隨濃度的增高增強(qiáng)（P<0.01），丹參素對(duì)TβRⅠ的抑制作用強(qiáng)于黃芪（P<0.01）。（4）TGF-β1可促進(jìn)HSC-T6

4、內(nèi)Smad2、3、7mRNA的表達(dá)；丹參素、黃芪下調(diào)HSC-T6內(nèi)Smad2、3mRNA的表達(dá)（P<0.01），并上調(diào)Smad7 mRNA的表達(dá)（P<0.01）。
　　 結(jié)論：體外細(xì)胞試驗(yàn)研究表明，丹參素、黃芪能下調(diào)HSC-T6細(xì)胞膜上TβRⅠ、Ⅱ的表達(dá)；下調(diào)Smad2、3mRNA的表達(dá)，上調(diào)Smad7mRNA表達(dá)；抑制HSC-T6活化增殖及TGF-β1促進(jìn)HSC-T6活化的作用，抑制α-SMA表達(dá)；減少Ⅰ、Ⅲ型膠原合成和分泌。