RFP-PLGA骨緩釋復合體的初步實驗研究.pdf

1、目的:①擬通過O/W乳化溶劑揮發(fā)法制備RFP-PLGA微球，以形態(tài)、粒徑分布、包封率和載藥量為指標考察各處方因素的影響，并篩選出最優(yōu)工藝;②擬采用前期優(yōu)化處方制備緩釋微球，與骨支架結合，并觀察微球的骨填充情況及體外釋放行為;③采用新西蘭大白兔作為動物模型，對RFP-PLGA骨緩釋復合體中RFP在體內的分布及緩釋行為進行了相關研究，同時考察了該復合物在體內的相容性。為探討術后脊柱結核患者抗結核治療，減少其副作用提供實驗依據(jù)。
　　方

2、法:①通過乳化-溶劑揮發(fā)法制備緩釋微球，以粒徑、載藥量、包封率為考察指標對處方中的不同因素如PLGA濃度，表面活性劑的種類及濃度，油水比，藥載比進行了單因素考察。并選取重要的影響因素進行正交實驗對處方進一步優(yōu)化，得出各影響因素對制備過程影響強度，并篩選出最優(yōu)處方;②采用超聲振蕩法將RFP-PLGA緩釋微球灌入異體骨內，再澆蓋一層殼聚糖溶液，真空干燥噴金后，用電子掃描顯微鏡和骨密度儀分別觀察RFP-PLGA緩釋復合體的填充狀態(tài)、外觀表面形

3、態(tài)及灌注前后骨密度的變化;體外釋放實驗分成三組:A組RFP晶體、B組RFP緩釋微球及C組RFP-PLGA骨緩釋復合體，并采用透析袋法進行體外釋放研究;③體內藥動學研究分成A組RFP口服給藥組、B組RFP-PLGA骨緩釋復合體組、C組RFP晶體-骨復合體組，后兩組植入兔腰椎骨性缺損處，并通過大體觀察、影像學觀察、骨密度觀察、組織分布結果、生化指標檢測、組織形態(tài)學觀察六個方面進行對比。采用HPLC-UV法測定血漿及各組織中的藥物濃度。采用S

4、PSS17.0軟件包進行分析，結果以均數(shù)±標準差即(x)±S表示，采用多種統(tǒng)計學分析方法，如t檢驗、方差分析及組間比較的SNK-q檢驗、LSD-t檢驗等，檢驗水準a=0.05，P值＜0.05為差異有顯著性意義。
　　結果:①通過單因素考察得知對考察指標具有較大影響的處方因素，在此基礎上對處方進行了優(yōu)化，結果中各處方因素的影響強度如下:藥載比＞PVA濃度＞PLGA濃度＞油水比，并確定較優(yōu)工藝為:PLGA濃度15mg·ml-1、藥載比

5、1∶2、PVA濃度2％、油水比1:5;平行制得3批微球粒徑為12.23±0.98μ m;載藥量、包封產(chǎn)率分別為(19.63±0.62)％、(59.49±2.62)％，微球冷凍干燥后，再分散性及外觀良好;
　?、隗w外釋放顯示:A組RFP晶體在24 h內釋放基本完全，B組RFP緩釋微球組及C組RFP-PLGA骨緩釋復合體組釋藥平緩，其中RFP緩釋微球組31d累計釋藥率達到近95％，釋放進行動力學方程擬合，顯示符合零級動力學方程F=0.

6、168*t; RFP-PLGA骨緩釋復合體組約31d累計釋藥率達到近92.31％，未見無明顯的突釋，進行動力學方程擬合，顯示符合零級動力學方程F=0.15*t;骨密度檢測:三組灌注前后及B、C組骨密度無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05);
　　③體內實驗表明:A組即口服給藥組雖然在局部腰椎體組織中能維持較高的有效濃度，但其在肝、脾、心、肺等臟器中也存在較高的濃度;C組即RFP晶體-骨復合體植入組，盡管在維持靶組織有效濃度的同時減小藥物

7、在其他臟器中的分布，但維持時間甚短，15天后已低于最低檢測濃度;相對而言，B組RFP-PLGA骨緩釋復合體植入新西蘭大兔給藥后，3天時RFP濃度為11±0.7μg/ml-1，在7天時RFP濃度為13.3±0.4μg/ml-1，在15天時RFP濃度為8.5±1.6μ g/ml-1，在30天時RFP濃度為1.6±0.4μg/ml-1，在40天時RFP濃度為0.45±0.21μg/ml-1均明顯高于有效抑菌濃度，在體內組織中緩慢下降，不僅其他

8、臟器中的藥物濃度低，而且40天時腰椎椎體RFP濃度仍可維持有效抑菌濃度，相對于C組在局部腰椎椎體組織中RFP的有效濃度持續(xù)時間較長;骨密度檢測:a.術后第7天:三組統(tǒng)計學比較分析:P＞0.05，無明顯統(tǒng)計學意義;b.術后第30天:A組與B、C組比較:P＜0.05，有明顯統(tǒng)計學意義;B組與C組比較:P＞0.05，無明顯統(tǒng)計學意義;c.術后第7天與第30天不同組別比較:A7組與A30組比較:P＞0.05，無明顯統(tǒng)計學意義，B7組與B30組比

9、較:P＜0.05，有明顯統(tǒng)計學意義，C7組與C30組比較:P＜0.05，有明顯統(tǒng)計學意義;肝毒性檢測:三組給藥前后比較未見明顯統(tǒng)計學差異;RFP-PLGA骨緩釋復合體行內植入腰椎骨性組織后，腰椎和腰大肌組織均未見明顯炎癥反應，亦未見相關正常組織的破壞或形態(tài)異常。
　　結論:
　?、?、乳化一溶劑揮發(fā)法中諸多因素對微球成形和質量具有明顯影響;2、篩選出最優(yōu)處方即PLGA濃度15mg· mL-1、PVA濃度2％、藥載比1:2及油