產腸毒素大腸桿菌菌影疫苗的制備及其免疫效果的評價.pdf

1、犢牛腹瀉是指犢牛在出生7h到12d內所發(fā)生的一種急性腹瀉，一般由腸道內細菌、病毒、寄生蟲等傳染性因素或者營養(yǎng)不良、飼養(yǎng)環(huán)境惡劣等非傳染性因素造成，嚴重時會引發(fā)脫水，造成犢牛大量死亡。犢牛腹瀉是全球奶牛、肉牛養(yǎng)殖過程中最常見的問題，往往帶來巨大的經濟損失，嚴重制約著養(yǎng)牛行業(yè)的發(fā)展。在各種導致犢牛腹瀉的因素中，產腸毒素大腸桿菌(ETEC)是最主要的病原菌，也是牛發(fā)生腸毒血癥的病原菌之一。目前，多通過接種疫苗來預防此疾病的發(fā)生。然而，由于大腸

2、桿菌血清型繁多，且不同區(qū)域流行情況不同，一些商品化疫苗往往不能得到很好的免疫效果，因此，新疫苗的研發(fā)一直是預防該病的重點。
　　菌影是近年來的一種新型疫苗。它是通過基因滅活的方式將細菌變成一種無胞質內容物，但保留完整的細菌菌體及外膜上各種抗原結構的無活性空胞體。由于菌影疫苗的免疫原性高，制備簡單，保存運輸方便，同時還具有免疫佐劑性質，能夠增強免疫應答等諸多優(yōu)點，使其成為國內外研究人員的研究熱點。
　　本研究以黑龍江部分牧場死

3、亡腹瀉犢牛的病料為研究材料，從中分離出致病性大腸桿菌，并對其所攜帶的毒力因子進行檢測，并對致病性大腸桿菌進行分型。結果顯示，該地區(qū)致犢牛腹瀉的主要大腸桿菌病原型為產腸毒素大腸桿菌。在此基礎上，我們篩選出一株疫苗候選菌株，制備成產腸毒素大腸桿菌菌影疫苗。
　　通過動物試驗對產腸毒素大腸桿菌菌影疫苗的免疫效果進行檢測。將30只小鼠隨機分為三組，每組10只:菌影疫苗組、滅活疫苗組和對照組。疫苗的接種方式為腹腔注射，免疫劑量為1×108

4、CFU，每兩周免疫一次，共免疫三次。每次免疫一周后采取血清，利用間接ELISA方法檢測免疫小鼠血清抗體水平。疫苗三免一周后對免疫小鼠進行腹腔攻毒，觀察并記錄攻毒一周內小鼠的死亡情況。通過疫苗對小鼠的保護率以及小鼠抗體水平的檢測評價疫苗的免疫效果。結果表明，菌影疫苗對感染小鼠有較高的保護率，且能夠誘導產生較高的抗體水平。
　　綜合本研究結果表明，產腸毒素大腸桿菌菌影疫苗具有良好的安全性，并具有很好的免疫原性，可激發(fā)動物體產生較好的免