阿利吉侖、厄貝沙坦、氨氯地平對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化合并腎動(dòng)脈狹窄大鼠抗炎癥性腎臟保護(hù)作用的對(duì)比研究.pdf

1、背景及目的：由于人口老齡化以及不良生活方式,在腎動(dòng)脈狹窄病因中,動(dòng)脈粥樣硬化所占比例增至71.9％，最終導(dǎo)致終末期腎臟病(end stage renal disease,ESRD)。研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化所致腎動(dòng)脈狹窄程度與腎損害嚴(yán)重程度并非完全平行；推測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化所致腎動(dòng)脈狹窄慢性腎損害可能是由血管狹窄以外的其他因素所致，炎癥反應(yīng)可能是腎損害進(jìn)展的重要機(jī)制之一，且發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性與腎損害嚴(yán)重程度有密切關(guān)系。不規(guī)則趨化因子(F

2、ractalkine,FKN)是具有粘附活性的趨化因子,參與白細(xì)胞特別的游走和活化。內(nèi)皮細(xì)胞釋放的趨化因子FKN與其受體CX3CR1結(jié)合以后,具有促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成和影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性的作用。此外,FKN在原發(fā)性和繼發(fā)性腎臟疾病等多種炎癥性疾病中表達(dá)增加并發(fā)揮重要作用,但目前尚無(wú)動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄炎癥性腎損害與FKN相關(guān)性報(bào)道?？垢哐獕核幬锞哂薪档蛣?dòng)脈壓,減少靶器官損傷的作用,但其在動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄中的應(yīng)用尚

3、存在爭(zhēng)議,它是否具有減輕炎癥性腎損害的作用及對(duì)Fractalkine和CX3CR1的干預(yù)作用值得進(jìn)一步研究。為此,通過(guò)復(fù)制動(dòng)脈粥樣硬化合并腎動(dòng)脈狹窄動(dòng)物模型，測(cè)定血清肌酐值、血漿腎素活性(PRA)，觀(guān)察狹窄側(cè)腎臟炎癥趨化因子FKN及其受體CX3CR1的分布，測(cè)定其量的變化，探討Fractalkine-CX3CR1與動(dòng)脈粥樣硬化炎癥性腎損害之間的相關(guān)性及直接腎素抑制劑阿利吉侖、Ang II受體抑制劑厄貝沙坦、鈣通道阻滯劑氨氯地平對(duì)其損傷性

4、的干預(yù)作用，為動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄腎損害的提供新的治療靶點(diǎn)。
　　方法：1、復(fù)制動(dòng)脈粥樣硬化合并腎動(dòng)脈狹窄動(dòng)物模型:SD大鼠隨機(jī)分為1K1C組、2K1C組及假手術(shù)組，平行針灸針縮窄法建立1K1C、2K1C模型后予注射VitD3+高脂喂養(yǎng)10周。2、阿利吉侖、厄貝沙坦、氨氯地平對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化合并腎動(dòng)脈狹窄大鼠抗炎癥性腎臟的保護(hù)作用:分別予生理鹽水、阿利吉侖、苯磺酸氨氯地平、厄貝沙坦灌胃4周后處死大鼠,分幾個(gè)部分進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn):(1

5、)采集血液,然后生化分析儀測(cè)定血肌酐值,放射免疫法測(cè)定PRA;(2)取SD大鼠狹窄側(cè)腎臟,一部分石蠟包埋做PAS染色;一部分-70℃冷凍保存;(3)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Fractalkine及其受體CX3CR1的表達(dá):取狹窄側(cè)腎臟石蠟切片,采用SABC法,分別檢測(cè)Fractalkine、CX3CR1在狹窄側(cè)腎臟的表達(dá)變化,黃色區(qū)域視為陽(yáng)性,Image-pro plus6.0軟件分析圖像;(4)RT-PCR法檢測(cè)Fractalkine mR

6、NA及CX3CR1 mRNA的表達(dá):取冷凍保存的腎臟組織經(jīng)RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄、PCR、電泳, Quangtity one軟件分析條帶灰度值。
　　結(jié)果：1、各組大鼠藥物干預(yù)后血壓變化情況:各組SD大鼠在藥物干預(yù)四周后,在同種造模方式下,藥物干預(yù)組較生理鹽水組血壓明顯下降,差異具有顯著性(P<0.05),但各種藥物降壓效果差異不顯著。2、三種抗高血壓藥物對(duì)大鼠腎功能影響:各組大鼠喂養(yǎng)14周后,在同種造模方式下,2K1C阿利吉侖組與2

7、K1C厄貝沙坦組較生理鹽水血肌酐升高水平明顯下降,差異有顯著性(P<0.05),其中，阿利吉侖組較厄貝沙坦組下降更顯著(P<0.05)。阿利吉侖并未引起1K1C組肌酐的升高,而1K1C厄貝沙坦組肌酐則顯著升高。與阿利吉侖組比較,氨氯地平差異亦具有顯著性(P<0.05)。3、三種抗高血壓藥物對(duì) PRA分泌調(diào)節(jié)的作用:各組大鼠血漿腎素水平在進(jìn)行干預(yù)處理后,2K1C生理鹽水組較假手術(shù)生理鹽水組PRA顯著升高(P<0.05);與生理鹽水組比較,

8、阿利吉侖組血漿腎素活性明顯下降(P<0.05),苯磺酸氨氯地平組明顯升高(P<0.05);與阿利吉侖組比較,差異亦具有顯著性(P<0.05),而厄貝沙坦組與氨氯地平組間比較差異不顯著(P>0.05)。4、免疫組化檢測(cè)Fractalkine及CX3CR1結(jié)果:1K1C、2K1C生理鹽水組較假手術(shù)生理鹽水組Fractalkine及CX3CR1在腎小管的表達(dá)均顯著增加(P<0.05),同種造模方式下,阿利吉侖組、厄貝沙坦組、氨氯地平組較生理鹽

9、水組Fractalkine及CX3CR1的表達(dá)量下調(diào)(P<0.05),以2K1C阿利吉侖組下調(diào)尤為明顯,而2K1C厄貝沙坦組與2K1C氨氯地平組比較差異亦具有顯著性(P<0.05),2K1C阿利吉侖組較1K1C阿利吉侖組Fractalkine及CX3CR1表達(dá)量減少較顯著(P<0.05)。5、RT-PCR法檢測(cè)Fractalkine mRNA及CX3CR1 mRNA的表達(dá),以目的條帶灰度值/內(nèi)參條帶灰度值表示,阿利吉侖組與厄貝沙坦組較生

10、理鹽水組 Fractalkine及CX3CR1表達(dá)均顯著下降(P<0.05),而氨氯地平1K1C和2K1C組表達(dá)比較差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與免疫組化結(jié)果一致。
　　結(jié)論：1、Fratalkine及CX3CR1在動(dòng)脈粥樣硬化合并腎動(dòng)脈狹窄大鼠腎臟表達(dá)增加,炎癥因素可能參與了動(dòng)脈粥樣硬化合并腎動(dòng)脈狹窄腎損傷過(guò)程。2、直接腎素抑制劑阿利吉侖、AT1受體拮抗劑厄貝沙坦以及鈣通道阻滯劑苯磺酸氨氯地平具有相似的降壓作用,但阿利吉