hepaCAM在腎癌中表達及對腎癌細胞侵襲力的影響.pdf

1、第一部分 目的：探討肝細胞粘附分子（hepatocyte cell adhesion molecule，hepaCAM）在腎癌中的表達及臨床意義。 方法：采用逆轉錄PCR（RT-PCR）方法檢測6例正常腎組織和30對腎癌及相應的癌旁組織中hepaCAMmRNA表達，分析其與腎臟病理學特征的關系。 結果：hepaCAMmRNA在6例正常腎組織均呈現(xiàn)高表達；而在30例癌組織中hepaCAM的表達顯著低于癌旁組織（P<

2、0.01），且其表達和腎癌分級、分期無顯著相關性（P>0.05）。 結論：hepaCAM基因在正常腎臟組織中高表達，在腎癌組織中呈低表達（或不表達），且不能用于評價腎癌的分級分期。 第二部分 目的：hepaCAM基因真核表達載體pEGFPN2/hepaCAM及空載體pEGFPN2的鑒定，觀察轉染后hepaCAM在786-0細胞中定位，獲得穩(wěn)定表達hepaCAM的786-0細胞株。 方法：將攜有hepaCA

3、M基因的重組真核表達載體pEGFPN2/hepaCAM經BamHⅠ/HindⅢ雙酶切及序列鑒定，轉染786-0細胞株，熒光顯微鏡計算脂質體轉染細胞效率并觀察hepaCAM蛋白786-0細胞的定位。G418篩選穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞，RT-PCR檢測mRNA表達水平。 結果：獲得含有hepaCAM基因的真核表達載體，建立穩(wěn)定、高效轉染786-0細胞的方法。重組質粒轉染786-0細胞的最佳轉染時間為48h，最合適質粒與脂質體的比例為

4、1：2。熒光顯微鏡顯示：hepaCAM主要定位于細胞質和細胞核周區(qū)域及突起表面，呈現(xiàn)典型細胞粘附分子特性。篩選出穩(wěn)定表達hepaCAM的786-0細胞，檢測到高表達的hepaCAM基因。 結論：重組質粒能夠有效穩(wěn)定轉染786-0細胞株，為進一步研究hepaCAM在RCC細胞中侵襲活性奠定了基礎。 第三部分 目的：探討hepaCAM基因導入對腎癌細胞侵襲活性的影響。 方法：MTT法及軟瓊脂克隆形成實驗觀察其

5、對腎癌細胞生長抑制作用；RT-PCR方法檢測MMP2和MMP9mRNA的表達，明膠酶譜法檢測MMP2和MMP9活性的變化，Transwell小室法檢測786-0細胞的體外侵襲能力。 結果：MTT顯示hepaCAM基因抑制細胞成活率在4、5、6天分別為26.5％、38.1％、35.7％（P<0.01）；克隆形成實驗顯示當hepaCAM基因轉染786-0細胞后，細胞克隆數(shù)減少5倍；MMP2及MMP9mRNA表達和酶活性明顯受抑制（P