褪黑素對牛卵泡內膜細胞凋亡和類固醇生成的作用研究.pdf

1、卵泡內膜細胞凋亡及類固醇生成在卵泡發(fā)育和閉鎖過程中發(fā)揮了重要作用。褪黑素調控卵泡內膜中凋亡和類固醇生成的具體機制目前還不清楚，該研究對于進一步闡明褪黑素在卵泡發(fā)育和閉鎖中的調控作用，促進卵泡體外培養(yǎng)和應用具有重要意義。本研究選擇牛3-4 mm卵泡在體外研究褪黑素對卵泡內膜細胞類固醇生成及卵泡內膜細胞凋亡的影響，并進一步闡明具體的調控機制。研究結果如下:
　　1.褪黑素對牛卵泡內膜細胞凋亡與類固醇生成的影響
　　用0 ng/m

2、L，1 ng/mL，10 ng/mL，100 ng/mL的褪黑素處理卵泡，撕取卵泡內膜，RT-qPCR檢測卵泡內膜細胞褪黑素受體MT1、MT2的表達，結果顯示10 ng/mL的褪黑素對褪黑素受體MT1、MT2的促進效果最明顯。卵泡培養(yǎng)液中添加10 ng/mL的褪黑素處理，RT-qPCR檢測撕取的卵泡內膜LHR，類固醇生成相關基因及凋亡基因BCL2、BAX、CASPASE的表達，Elisa檢測卵泡培養(yǎng)上清中雄烯二酮和孕酮的分泌。結果顯示褪

3、黑素顯著促進LHR和STAR的表達，顯著促進孕酮的分泌，顯著促進抗凋亡基因BCL2的表達，BCL2和BAX比率增加。用10 ng/mL褪黑素處理體外培養(yǎng)的卵泡內膜細胞，使用TUNEL染色法檢測細胞的凋亡情況，染色結果顯示褪黑素處理組的凋亡率低于對照組。本研究表明褪黑素影響卵泡中卵泡內膜細胞類固醇的生成，抑制卵泡內膜細胞的凋亡。
　　2.MT1和MT2介導褪黑素對卵泡內膜細胞凋亡與類固醇生成的作用
　　在含有10 ng/mL褪

4、黑素的卵泡培養(yǎng)液中添加10μM褪黑素受體非特異性的抑制劑Luzindole或10μM MT2特異性抑制劑4P-PDOT處理，RT-qPCR檢測撕取的卵泡內膜細胞褪黑素受體MT1、MT2和LHR、STAR，抗凋亡基因BCL2的表達，Elisa檢測卵泡培養(yǎng)上清中孕酮的分泌。結果顯示，添加Luzindole后顯著抑制褪黑素誘導的MT1和MT2的表達，添加4P-PDOT后顯著抑制MT2的表達;添加Luzindole或4P-PDOT處理均顯著抑制

5、褪黑素誘導的LHR、STAR、BCl2的表達;添加Luzindole處理顯著抑制孕酮的分泌。本研究表明MT1和MT2介導褪黑素對卵泡內膜細胞凋亡和類固醇生成的調控作用。
　　3.PI3K/AKT通路介導褪黑素對卵泡內膜細胞凋亡與類固醇生成的作用
　　在含有10 ng/mL褪黑素的卵泡培養(yǎng)液中添加25μM通路抑制劑LY294002處理，RT-qPCR檢測撕取的卵泡內膜細胞LHR、STAR及抗凋亡基因BCL2的表達，Elisa檢