低氧刺激下Egr-1對細胞微管骨架穩(wěn)定作用的研究.pdf

1、早期生長反應基因Egr-1屬即刻早期基因家族，其編碼的蛋白產(chǎn)物是一種含鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子，能在多種刺激因子的誘導下快速短暫表達、與多種下游基因的啟動子區(qū)域相結(jié)合，上調(diào)或下調(diào)相關基因的轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生各種生物學功能。Egr-1不僅與細胞生長有關，而且參與多種細胞的正常分化、凋亡。Egr-1在多種惡性腫瘤中表達消失，因此，它可作為某些惡性腫瘤的生物學標記，對腫瘤的診斷及療效評估有重要意義。Egr-1作為一種早期生長反應因子，在低氧誘導下有表達升高

2、的現(xiàn)象，同時與短期低氧誘導的代謝性應激和細胞骨架重塑有關。本文研究旨在低氧作用TEgr-1對細胞微管骨架的保護調(diào)控。主要結(jié)果如下： 1.在有絲分裂間期A549細胞內(nèi)的Egr-1主要分布在細胞質(zhì)中，可以明顯觀察到有類似于微管骨架的絲狀分布。在低氧刺激下Egr-1不入核，并伴有快速、短暫的表達上升。 2.細胞經(jīng)過低溫刺激或Nocodazole處理一段時間后，細胞微管骨架解聚。低氧處理能保護細胞微管骨架，延緩低溫刺激或Noco

3、dazole對細胞微管結(jié)構(gòu)的破壞。用RNA干擾的方法下調(diào)細胞內(nèi)源Egr-1的表達后，細胞骨架結(jié)構(gòu)變得異常，微管收縮彎折嚴重，無法舒展。同時，MTT實驗檢測細胞活力顯示，Egr-1內(nèi)源表達下調(diào)后的細胞活力明顯降低60％，推測主要是由于細胞凋亡引起的。 3.有絲分裂周期中，Egr-1在A549細胞中與微管骨架存在共分布現(xiàn)象。在前期，Egr-1能夠沿著微管形成類似絲狀的結(jié)構(gòu)，中期形成紡錘體樣，并且在中心體處產(chǎn)生明顯的聚集，但不分布于星

4、體微管。進入后期和術(shù)期，從中心體到細胞縊裂的中間體均有Egr-1分布，并在中間體處有很強的聚集。其中Egr-1駐留在紡錘體處及在中心體處強烈的分布提示Egr-1可能與細胞有絲分裂相關。另外，下調(diào)Egr-1的內(nèi)源表達，細胞有絲分裂相明顯減少，這也說明Egr-1與細胞的有絲分裂講程有關。 綜上所述，我們認為低氧刺激是通過上調(diào)Egr-1的表達而起到重塑保護細胞微管骨架的作用。提示Egr一1與微管解聚裝配有關，而且是指導細胞有絲分裂的一