利用骨髓間充質干細胞復合組織工程支架構建人工椎板的實驗研究.pdf

1、目的：利用骨髓間充質干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)復合組織工程支架構建人工椎板。
　　方法：抽取2周齡新西蘭大耳白兔骨髓血,利用離心貼壁法獲取骨髓間充質干細胞,并行擴增、傳代。將傳代所得細胞行成骨誘導,并將其分別定植于p-磷酸三鈣和膠原蛋白海綿上,構建組織工程骨。取3月齡新西蘭大耳白兔36只,隨機分為3組,分別記為A、B、C組,每組12只,由后正中入路咬除L6椎板,構建全椎板減壓動物模型,A組留作

2、空白對照組,B組植入B-磷酸三鈣組織工程骨,C組植入膠原蛋白海綿組織工程骨,以構建人工椎板。分別于術后第4、8、16周行X線、CT及MRI檢查,并行CT三維重建,觀察椎板生成情況、椎管形態(tài)及管徑、椎板與硬脊膜間隙等。分別于術后第2、4、8、16周處死動物,取材行HE、Masson及天狼星紅染色,并行免疫組化及成骨分析,觀察成骨情況。
　　結果：分別于術后第4、8、16周行CT及MRI檢測,可見A組動物模型L6處椎板缺損,B組CT示

3、第4周L6局部高密度區(qū),第8、16周L6局部高密度區(qū)漸消失,椎板缺損處密度漸高,C組CT示第4周L6局部椎板缺損,第8、16周L6局部椎板生成,密度漸高,且新生椎板形態(tài)光整,彎曲度接近椎板生理弧度。分別于術后第2、4、8周取材行HE、Masson染色,A組兩種染色均可見大量纖維組織隨時間推移增生,B組及C組兩種染色均可見纖維組織降解,新生骨生成。分別于術后第2、4、8周利用HE染色行成骨分析,計算骨體積分數(shù)(bone-volume fr

4、action,BVF),B組結果為:19.57％、23.22％、24.28％,C組結果為:14.76％、36.24％、53.04％;并計算骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th.),B組結果(μm)為:4.39、5.24、6.78,C組結果(μm)為:4.66、8.09、18.36.分別于術后第2、4、8周利用免疫組化兩步法行BMP-2檢測,B組結果(％)為:8.47±0.56、9.43±1.17、10.38±