甲氧滴滴涕對小鼠卵母細胞體外成熟和體外受精的毒性作用.pdf

1、甲氧滴滴涕(methoxychlor,MXC)是一種替代滴滴涕的有機氯殺蟲劑，因其殺蟲效果明顯，生物毒性相對較低，在許多國家得到廣泛應用。但由于大規(guī)模的使用，加之甲氧滴滴涕所具有難降解性、生物聚積性和沿食物鏈傳遞的特性，使其所造成的環(huán)境污染已遍及全球生態(tài)系統(tǒng)。在土壤、河流、動植物體內(nèi)、人體體液、甚至孕婦血液、胎盤、臍血、新生兒體內(nèi)、乳汁中都檢測到了甲氧滴滴涕。動物實驗研究發(fā)現(xiàn)MXC具有不孕、流產(chǎn)、誘導卵泡閉鎖等生殖毒性。因此，研究MXC

2、對生殖細胞的影響具有重要意義。而有關MXC對體外卵母細胞成熟和受精及胚胎發(fā)育的影響的報道卻很少。我們的研究以昆明白小鼠未成熟卵母細胞為研究對象，采用體外成熟、體外受精及早期胚胎發(fā)育培養(yǎng)的方法研究不同劑量甲氧滴滴涕對卵母細胞成熟、受精和早期胚胎發(fā)育的影響。
　　研究目的：1、研究MXC對小鼠未成熟卵母細胞體外成熟的毒性作用；2、研究MXC對小鼠成熟卵母細胞體外受精的毒性作用；3、研究MXC對小鼠早期胚胎發(fā)育的影響
　　第一部分

3、，甲氧滴滴涕對小鼠卵母細胞體外成熟的毒性作用
　　研究方法：1、超促排卵得到未成熟小鼠卵母細胞。實驗組MXC濃度分別為7.25，14.5，29μg/mL；對照組直接用M2培養(yǎng)液培養(yǎng)，各組培養(yǎng)時間均為24h。培養(yǎng)過程中在倒置顯微鏡下觀察各組生發(fā)卵泡破裂(GVBD)和第一極體(PB1)的形成情況,出現(xiàn)PB1的卵母細胞視為核成熟（MⅡ期）。2、激光共聚焦觀察有絲分裂紡錘體的形成。3、將出現(xiàn)PB1的卵母細胞進行熒光染色，觀察皮質(zhì)顆粒的分布

4、，判斷核成熟卵母細胞胞質(zhì)成熟情況。4、鏡下觀察MXC對卵丘擴展的影響。
　　研究結(jié)果：1、培養(yǎng)24h時，甲氧滴滴涕各處理組與對照組卵母細胞GVBD發(fā)生率差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；培養(yǎng)過程中GVBD發(fā)生實驗組較同期對照組也沒有明顯延遲。但是成熟率卻從71.2％（對照組）逐漸降低至22％（29μg/mLMXC組），7.25μg/mLMXC組（52.8％）和14.5μg/mLMXC組（44.4％）與對照組比較差別也有統(tǒng)計學意義。

5、2、實驗組較對照組MⅠ期紡錘體星體變小。3、MⅡ期卵母細胞皮質(zhì)顆粒呈單層狀排布于細胞膜下的比例實驗組和對照組差異不顯著(P>0.05)。MXC對核成熟的卵母細胞胞質(zhì)成熟影響不明顯。4、MXC能抑制卵丘擴展，且隨著MXC濃度的升高，卵丘擴展程度明顯減弱。
　　研究結(jié)論：1、甲氧滴滴涕對小鼠卵母細胞的毒性作用，通過抑制卵母細胞胞核成熟，使小鼠卵母細胞成熟率明顯下降，從而使母體的受孕能力下降，導致不孕。2、甲氧滴滴涕可直接作用于卵母細胞

6、，使卵母細胞有絲分裂紡錘體形成異常，從而抑制卵母細胞核的成熟。3、甲氧滴滴涕可能通過抑制卵丘細胞的擴展，來影響后續(xù)胚胎發(fā)育，造成流產(chǎn)等。但對皮質(zhì)顆粒的分布影響不明顯，即甲氧滴滴涕不能抑制核成熟卵母細胞的胞質(zhì)成熟。
　　第二部分，甲氧滴滴涕對小鼠卵母細胞體外受精和早期胚胎發(fā)育的影響
　　研究方法：1、將7.25和14.5μg/mLMXC組核成熟的小鼠卵母細胞行體外受精，觀察卵母細胞的受精能力。2、將受精卵吸出培養(yǎng)，每日在顯微鏡

7、下觀察胚胎發(fā)育情況，分析受精卵的2-細胞形成率、4-細胞形成率、8-細胞形成率、桑椹胚率、囊胚率和胚胎孵化率。3、選擇形態(tài)較好的囊胚進行胚胎細胞染色計數(shù)。
　　研究結(jié)果：1、7.25μg/mLMXC組與對照組小鼠受精卵的受精率，2-細胞形成率、4-細胞形成率、8-細胞形成率差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；14.5μg/mLMXC組與對照組小鼠卵母細胞的受精率，2-細胞形成率、4-細胞形成率差別不明顯，但8-細胞期形成率在兩組間差