阻斷熱休克蛋白90分子伴侶功能對慢性髓系白血病細胞的影響及其分子機制研究.pdf

1、熱休克蛋白90(Hsp90)是細胞內(nèi)最重要的分子伴侶蛋白，在其輔助伴侶分子的協(xié)助下，調(diào)節(jié)眾多底物蛋白的構(gòu)象成熟及穩(wěn)定性。目前發(fā)現(xiàn)與腫瘤細胞的異常增殖、藥物耐受及抗凋亡信號通路活化密切相關的多種激酶蛋白(Bcr/Abl、Src、Akt)、生長因子受體(EGFR、ErbB2)、轉(zhuǎn)錄因子(突變型p53、低氧誘導因子HIF)等都是Hsp90的底物蛋白。因此Hsp90成為抗腫瘤治療的理想靶點。 目的：①研究Hsp90抑制劑17-AAG、組

2、蛋白去乙?；敢种苿〧K228誘導人白血病細胞株K562凋亡及其分子機制。②研究17-AAG、FK228聯(lián)合多柔比星(DNR)對K562細胞的殺傷作用。 方法：采用四氮唑鹽還原法(MTT法)檢測藥物對K562細胞生長抑制的劑量-時間-效應關系，瑞氏-姬姆薩染色觀察細胞形態(tài)學變化，Hoechst33342熒光染色觀察凋亡細胞核的變化，流式細胞儀檢測細胞凋亡率和細胞周期變化，Western蛋白印跡技術檢測相關蛋白分子的變化，免疫共沉

3、淀法觀察蛋白分子之間的關系。 結(jié)果：①17-AAG、FK228呈時間和劑量依賴性殺傷K562細胞，阻斷細胞周期于G0/G1期，有效清除Hsp90底物蛋白，阻斷Raf/Mek-Erk及PI3K/Akt信號通路，誘導細胞凋亡。②FK228使Hsp70發(fā)生乙酰化修飾，但不能影響Hsp90的乙?；潭?。③17-AAG、FK228與DNR聯(lián)合用藥，呈現(xiàn)劑量依賴性殺傷效應，藥物濃度比例不同時其聯(lián)合效應不同。 結(jié)論：①17-AAG直接

4、抑制K562細胞中Hsp90的分子伴侶功能，F(xiàn)K228通過使Hsp70發(fā)生乙酰化修飾間接影響Hsp90的分子伴侶功能，從而特異性清除其底物蛋白Bcr/Abl、Raf-1、Akt、Cdk4、XIAP、survivin等，導致細胞內(nèi)與增殖和抗調(diào)亡相關的Raf/Mek-Erk、PI3K/Akt信號通路被阻斷，抑制細胞增殖，誘導細胞調(diào)亡。②17-AAG、FK228與DNR聯(lián)合用藥，呈現(xiàn)劑量依賴性殺傷效應，藥物濃度比例變化會影響聯(lián)合殺傷效應。