COX-2和Heparanase-1在腎上腺腫瘤中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、研究背景:近年來隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，尤其是在影像學(xué)(CT、MRI等)和生化檢測手段的改進(jìn)及人們健康體檢意識的不斷提高，腎上腺腫瘤的診斷率呈逐年上升趨勢。腎上腺腫瘤主要包括腎上腺皮質(zhì)腫瘤和腎上腺髓質(zhì)腫瘤，其中腎上腺皮質(zhì)腫瘤分為腎上腺皮質(zhì)腺瘤和腎上腺皮質(zhì)癌;腎上腺髓質(zhì)腫瘤分為良性嗜鉻細(xì)胞瘤、惡性嗜鉻細(xì)胞瘤、副神經(jīng)節(jié)瘤。在腎上腺皮質(zhì)腫瘤中，腎上腺皮質(zhì)腺瘤預(yù)后較好，經(jīng)手術(shù)切除?？芍斡?，而腎上腺皮質(zhì)癌的惡性程度較高，侵襲性較強(qiáng)，早期確診率

2、不高，其治療仍以根治手術(shù)為主，缺乏有效的輔助治療，可早期出現(xiàn)肺、淋巴結(jié)、肝、骨等轉(zhuǎn)移，其年發(fā)病率大約為4～12/100萬，而5年生存率＜35％。據(jù)腎上腺皮質(zhì)癌的組織結(jié)構(gòu)與形態(tài)和腎上腺皮質(zhì)腺瘤相像，因此鑒別腎上腺皮質(zhì)腫瘤的良、惡性比較困難，有時(shí)需結(jié)合它們的臨床表現(xiàn)、大體標(biāo)本、影像學(xué)、鏡下病理組織學(xué)形態(tài)和免疫組化等進(jìn)行綜合判斷。目前腎上腺皮質(zhì)腫瘤的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，有時(shí)僅根據(jù)組織病理切片檢查難以判斷其良、惡性程度，從而給治療帶來了很大的困能

3、。
　　 目前嗜鉻細(xì)胞瘤的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。至今腎上腺惡性嗜鉻細(xì)胞瘤的診斷仍是根據(jù)腫瘤侵及鄰近臟器或轉(zhuǎn)移至無嗜鉻組織的嗜鉻細(xì)胞而定。腫瘤細(xì)胞分化程度，如絲狀分裂活性，核酸多型性等均不適用于區(qū)別嗜鉻細(xì)胞瘤的良惡性。惡性嗜鉻細(xì)胞瘤診斷病理及影像學(xué)缺乏特異性指標(biāo)，公認(rèn)的金標(biāo)準(zhǔn)是在沒有嗜鉻細(xì)胞瘤的區(qū)域出現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶。從臨床表現(xiàn)、影像學(xué)表現(xiàn)和組織病理學(xué)特點(diǎn)上去鑒別良、惡性腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤是非常困難的，目前沒有可靠的組織學(xué)或者生物標(biāo)記物能鑒別良

4、、惡性腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤。
　　 COX-2(cyclooxygenese-2，環(huán)氧合酶-2):又稱前列腺素過氧化物合成酶，是前列腺素(PG)合成過程中一個(gè)重要的限速酶，可以將花生四烯酸代謝成各種前列腺素產(chǎn)物，從而在機(jī)體的生理和病理過程中發(fā)揮作用，并能通過促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤新血管形成、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤等途徑參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程。
　　 Heparanase-1(乙酰肝素酶-1，HPA-1):是一種作用

5、于細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，可在特定部位裂解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparansulfateproteoglycans，HSPGs)的葡萄糖苷酸內(nèi)切酶。HSPGs廣泛存在于各種組織的細(xì)胞表面、細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)和基底膜(basementmembrane，BM)中，是ECM和BM的重要構(gòu)成成分糖氨聚糖的主要成分。腫瘤轉(zhuǎn)移所必須的兩個(gè)最重要的步驟是新生血管生成以及穿過基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)。在腫瘤狀態(tài)下，H

6、eparanase-1具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成的作用。
　　 環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenese-2，COX-2)和乙酰肝素酶(heparanase-1，HPA-1)是近年來研究的熱點(diǎn)，已被大量研究表明，它們在人類大部分惡性腫瘤中呈高表達(dá)，如頭頸部惡性腫瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、黑色素瘤以及前列腺癌、膀胱癌、腎癌等，并與腫瘤侵襲、腫瘤血管形成及預(yù)后相關(guān)。但目前關(guān)于COX-2和Heparanase-1在腎上腺皮

7、質(zhì)腫瘤發(fā)生發(fā)展中的可能的作用機(jī)制和它們是否可以成為早期鑒別腎上腺皮質(zhì)腫瘤的良惡性和判斷預(yù)后的可靠生物學(xué)指標(biāo)，國內(nèi)外尚未見有報(bào)道。此外，關(guān)于COX-2和Heparanase-1在腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)及相關(guān)性，國內(nèi)外罕見有報(bào)道，有待進(jìn)一步研究與探討。
　　 研究目的:1.探討COX-2和Heparanase-1在正常腎上腺、腎上腺皮質(zhì)腺瘤和腎上腺皮質(zhì)癌中的表達(dá)和臨床意義;2.探討COX-2和Heparanase-1在正常腎上腺，

8、腎上腺良性嗜鉻細(xì)胞瘤和腎上腺惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)和臨床意義;3.探討COX-2和Heparanase-1的表達(dá)在腎上腺腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中的作用，以及了解它們是否可以成為早期鑒別腎上腺良、惡性腫瘤及判斷預(yù)后的可靠生物學(xué)指標(biāo)，從而為腎上腺腫瘤的臨床鑒別診斷與治療提供新的手段。
　　 研究方法:1.選取1990年4月份～2010年12月份在廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院住院手術(shù)治療，且有完整的臨床、病理和隨訪資料的腎上腺皮質(zhì)腫瘤患者存檔石蠟標(biāo)本

9、47例，其中腎上腺皮質(zhì)腺瘤33例，腎上腺皮質(zhì)癌14例。所有組織標(biāo)本統(tǒng)一采用10％甲醛溶液固定，石蠟包埋，組織切片厚度為2.5μm。另取健康腎移植供體正常腎上腺組織標(biāo)本10例作為對照組。腎上腺皮質(zhì)腺瘤組中男性13例，女性20例;腎上腺皮質(zhì)癌組中，男性10例，女性4例。隨訪時(shí)間為126天～2319天。
　　 2.選取1990年4月份～2010年12月份在廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院住院手術(shù)治療，且有完整的臨床、病理和隨訪資料的腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤

10、存檔石蠟標(biāo)本32例，其中腎上腺良性嗜鉻細(xì)胞瘤26例，惡性嗜鉻細(xì)胞瘤為6例。所有組織標(biāo)本統(tǒng)一采用10％甲醛溶液固定，石蠟包埋，組織切片厚度為2.5μm。另取健康腎移植供體正常腎上腺組織標(biāo)本10例作為對照組。腎上腺良性嗜鉻細(xì)胞瘤組中男性16例，女性10例;腎上腺惡性嗜鉻細(xì)胞瘤組中，男性3例，女性3例。隨訪時(shí)間為403天～3721天。
　　 3.應(yīng)用免疫組織化學(xué)NovolinkTMpolymer法檢測腎上腺腫瘤和正常腎上腺中COX-2

11、、Heparanase-1的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)用磷酸鹽緩沖液(PBS)替代—抗作陰性對照，以己知染色表達(dá)陽性的胃癌切片標(biāo)本作為COX-2、Heparanase-1的陽性對照，最佳COX-2、Heparanase-1稀釋濃度均為1:200(稀釋劑為—抗稀釋液)。
　　 4.結(jié)果判斷:Heparanase-1與COX-2的表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿，陽性表達(dá)呈淺黃色、棕黃色或棕褐色顆粒。在排除非特異性染色前提下，由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師在不知臨

12、床和病理資料的情況下獨(dú)立觀察切片，對免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行評估。免疫組化結(jié)果根據(jù)著色陽性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度分別評分。評估方法采用半定量積分法對染色結(jié)果進(jìn)行判斷:隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，陽性細(xì)胞數(shù):0-5％計(jì)0分;6-25％計(jì)1分;26-50％計(jì)2分;51-75％計(jì)3分;76-100％計(jì)4分;陽性表達(dá)強(qiáng)度:無染色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分;棕黃色計(jì)2分;棕褐色計(jì)3分。兩種積分相乘，積分0分，為陰性(-);積分1-4分，為弱陽性(+);積分5-

13、8分，為中等陽性(++);積分9-12分，為強(qiáng)陽性(+++)。若判定結(jié)果相差3分，則重新判定。
　　 5.采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所得數(shù)據(jù)陽性表達(dá)率的比較應(yīng)用x2檢驗(yàn)，采用Fisher，s確切概率法結(jié)合Bonfferoni方法進(jìn)行率的多重比較，采用新的檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05/3=0.0167;檢驗(yàn)各因素間的相關(guān)性用Spearmen等級相關(guān)分析進(jìn)行;在進(jìn)行Cox模型分析前，先用log-rank檢驗(yàn)對單因素分析，然后選

14、擇單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量進(jìn)行Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 研究結(jié)果:1.腎上腺皮質(zhì)癌中COX-2和Heparanase-1的表達(dá)均明顯高于正常腎上腺和腎上腺皮質(zhì)腺瘤，表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0167);COX-2和Heparanase-1在腎上腺皮質(zhì)腺瘤與正常腎上腺中的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.0167);COX-2與Heparanase-1在腎上腺皮質(zhì)腺瘤、腎上腺皮質(zhì)

15、癌中的表達(dá)均呈正相關(guān)(P＜0.05);COX-2與Heparanase-1的表達(dá)與腎上腺皮質(zhì)癌患者的預(yù)后有關(guān)(P＜0.05)，COX-2和Heparanase-1存在統(tǒng)計(jì)上的共線性問題，即二者反應(yīng)相同的信息，用其一即可預(yù)測患者的預(yù)后，COX-2或Heparanase-1的表達(dá)越高，患者預(yù)后越差。
　　 2.惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中COX-2的表達(dá)明顯高于腎上腺良性嗜鉻細(xì)胞瘤和正常腎上腺，表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0167);惡性嗜

16、鉻細(xì)胞瘤中Heparanase-1的表達(dá)明顯高于腎上腺良性嗜鉻細(xì)胞瘤，表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0167)，與正常腎上腺中Heparanase-1的表達(dá)相比較，表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.0167);COX-2和Heparanase-1在腎上腺良性嗜鉻細(xì)胞瘤和正常腎上腺中的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.0167);COX-2和Heparanase-1在腎上腺良性嗜鉻細(xì)胞瘤和腎上腺惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)均呈正相關(guān)，它們的相關(guān)系數(shù)分