椎間盤炎動物模型的建立及自免疫狀態(tài)的研究.pdf

1、目的：通過手術破壞纖維環(huán)和軟骨終板建立椎間盤炎的動物模型，探討其影像學表現(xiàn)及自免疫狀態(tài)表達的變化過程，探討自免疫反應在椎間盤炎中的作用機制，為臨床診斷和治療提供理論基礎。 方法：選擇健康成年新西蘭大耳白兔50只，雌雄不限，隨機分為三組：手術組(30只)，經前外側入路手術破壞腰椎間盤纖維環(huán)及軟骨終板，建立兔椎間盤炎動物模型；設立假手術組(10只)及對照組(10只)。對照組即刻行X線及MRI檢查，處死取腰3/4、腰4/5、腰5/6椎

2、間盤標本。假手術組同手術組取相同手術入路，暴露椎間盤但不破壞纖維環(huán)和軟骨終板。手術組與假手術組分別于術后1周、2周、4周、8周、12周分批處死動物，處死取材前行X線片、MRI檢查。取手術區(qū)椎間盤標本，行：(1)常規(guī)HE染色，形態(tài)學比較及淋巴細胞的表達；(2)Masson染色，觀察肌組織炎癥纖維化表現(xiàn)；(3)應用免疫組化技術和免疫熒光技術觀察標本CD4陽性、CD8陽性T淋巴細胞，免疫球蛋白IgG、IgM的表達。手術組與假手術組、對照組進行

3、比較以分析各指標的表達及變化過程，探討自免疫反應在椎間盤炎中的作用；(4)細菌學培養(yǎng)。 結果： 1.影像學表現(xiàn)：手術組常規(guī)X線檢查在術后1-2周未見異常征象，術后4周顯示手術區(qū)椎間隙狹窄，術后12周可見椎體骨質破壞和硬化。術后4周MRI矢狀位T2WI上即可見手術椎間盤信號異常，呈不同程度的破壞、碎裂、變小，正常髓核的高信號消失，呈低信號改變。終板及終板下椎體松質骨有不同程度的侵犯破壞致椎體和椎間盤分界模糊不清，相鄰椎體受

4、累，T2WI上呈混雜斑點狀高信號。術后12廚T2WI上可見手術椎間盤相鄰椎體高信號，發(fā)生病理性骨折。假手術組與對照組均未見異常。 2.HE染色：光鏡下可見手術組椎間盤內、外層纖維環(huán)紊亂，失去正常結構，膠原纖維不連續(xù)、增生，外層纖維環(huán)成纖維細胞增多，術后1-4周可見淋巴細胞浸潤，近纖維環(huán)內層髓核部分有大量軟骨細胞增生。假手術組及對照組則無上述表現(xiàn)。 3.Masson染色：光鏡下可見手術組椎間盤外層纖維環(huán)呈綠色，其邊緣肌組織

5、呈紅色，兩者交界的灰色區(qū)域為肌組織因炎癥反應而正纖維化。其間散在淋巴細胞。 4.免疫組化染色：手術組1周、2周、4周的標本可見近邊緣細胞浸潤區(qū)有CD4陽性、CD8陽性淋巴細胞分布，其中CD4陽性淋巴細胞主要在術后1周、2周取材的標本表達較多，CD8陽性淋巴細胞則在術后2周、4周取材的標本表達較多。而假手術組則于術后1周、2周可見有極少量淋巴細胞表達，對照組未見淋巴細胞表達。手術組淋巴細胞表達與假手術組、對照組比較具有統(tǒng)計學意義。

6、 5.免疫熒光：手術組可見手術椎間盤近邊緣區(qū)免疫球蛋白IgG、IgM呈陽性反應，于1周少量表達，術后2周、4周、8周大量表達。假手術組及對照組均可見IgG極少量表達，未見IgM表達。手術組與假手術組、對照組比較具有統(tǒng)計學意義。 6．細菌培養(yǎng)陰性。 結論： 1．運用前外側入路手術破壞纖維環(huán)及軟骨終板可以建立椎間盤炎動物模型，其影像學表現(xiàn)符合臨床文獻對椎間盤炎的報道； 2．纖維環(huán)及軟骨終板受破壞后，髓