穿心蓮內(nèi)酯(AP)對內(nèi)皮細胞表達趨化因子及CD40-CD40L的影響.pdf

1、目的:觀察濃度不同的穿心蓮內(nèi)酯(andrographolide)對被氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)干預的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)表達趨化因子MCP-1、MIP-1α及表面抗原CD40-CD40L的影響,探討穿心蓮內(nèi)酯是否具有抗動脈粥樣硬化炎性反應(yīng)的作用及其可能的作用機制。
　　方法:在無菌條件下于同濟醫(yī)院產(chǎn)科手術(shù)室取健康新生兒臍帶,采用胰蛋白酶消化法原代分離并培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞。采用倒置顯微鏡下形態(tài)學觀察及間接免疫熒光Ⅷ

2、因子相關(guān)抗原鑒定內(nèi)皮細胞。將培養(yǎng)好的第3代細胞以濃度為1×106/ml接入6孔培養(yǎng)板中并置于5％CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),待細胞近長滿培養(yǎng)板底部后行無血清同步培養(yǎng)24小時,繼而將細胞分成以下6組:
　　1、空白對照組:加入2mlM199培養(yǎng)24小時;
　　2、ox-LDL組:M199+0.2mg ox-LDL培養(yǎng)24小時;
　　3、ox-LDL+AP(25mg/L)組;
　　4、ox-LDL+AP(50mg/L

3、)組;
　　5、ox-LDL+AP(100mg/L)組;
　　6、ox-LDL+AP(200mg/L)組;ox-LDL終濃度為0.1mg/ml。
　　先將3-6組的細胞與喜炎平注射液中培養(yǎng)2小時,然后再加入ox-LDL共同培養(yǎng)至24小時。用間接酶聯(lián)免疫實驗(ELISA)檢測細胞上清液中MCP-1、MIP-1α蛋白的表達;干預好的細胞用于提取總的RNA及流式細胞術(shù)實驗;應(yīng)用定量RT-PCR檢測MCP-1、MIP-1α m

4、RNA的表達;各組細胞表面CD40/CD40L的表達采用間接免疫熒光得以檢測。
　　結(jié)果:與對照組相比,ox-LDL組MCP-1、MIP-1α蛋白、mRNA表達明顯升高(P<0.01),內(nèi)皮細胞表面CD40及CD40L熒光強度明顯增強;與ox-LDL組相比,低劑量穿心蓮內(nèi)酯組(25mg/L、50mg/L組)MCP-1、MIP-1α蛋白、mRNA表達無明顯變化(P>0.05),細胞表面CD40及CD40L熒光強度無明顯增減;而中高劑